烟草本塞姆氏（Nicotiana+Benthamiana）中DREB转录因子克隆及功能分析.pdfVIP

Benthamiana)中DREB转录因子的克降及功能分析 烟草本睾姆氏(Nicotiana 摘 要 干旱、高盐、低温等逆境胁迫是影响植物生长发育和品质形成的主要环境因素。在烟草 农业生产中，由于烟苗移栽期的低温和苗期及烟株生长发育后期的干早，对烟株生长发育和 烟叶品质形成造成了不良影响，给烟农带来巨大的经济损失。长期以来为解决这一问题，烟 草科技工作者从栽培和大田管理方面采取了许多措施，但收效甚微，只有从分子水平彻底改 造烟株对非生物胁迫的适应性和耐受性，才能彻底解决这一问题。DREB转录因子可以调控 烟草基因组中一系列抗非生物逆境胁迫的功能基因表达，增强烟株在逆境胁迫中的耐受性， 因此对烟草中DREB转录因子基因的分离克隆及功能分析，将为采用分子生物学方法提高 烟株的抗逆性奠定基础。本研究以野生烟草本塞姆氏(NicotianaBenthamiana)品n种为实验材 料，从中分离克隆得到两个DREB类转录因子基因，并对其功能进行分析，发现了烟草中 DREBP与DRE顺式元件结合的关键氨基酸。主要研究内容如下： 1．通过从GenBank获取得到的EST序列分析，利用分子生物学技术从烟草中克隆得到 基因插入YepGAP酵母单杂交载体进行功能检测，发现两个基因的WDRE型酵母转化体均 mol／L 不能在含有0．03 NbDREB2基因插入到酵母单杂交载体pGADT7中做反式激活检测，结果显示只有 mol／L 3-AT的SD／HisUrat晒平板上生长，并激 NbDREBI／pGADT7重组体能在含有0．03 调节转录功能。 为芳香族氨基酸、一个为中性氨基酸，性质上差别较大。因此，选定在M∞魁口J和NbDREB2 基因的AP2区第二位氨基酸处进行点突变。突变后的AP2区插入酵母单杂交载体pGADT7 mol／L3-AT的SD／His 进行功能检测，朋渺胜B2第二位氨基酸N突变成Y后能在含有0．03 突变成N后失去了与DRE元件结合的能力。表明烟草DREB类转录因子AP2区的第2位 酪氨酸残基(Y)是识别并结合DRE顺式元件的关键氨基酸。 关键词：烟草；基冈分离；克隆；DREB转录因子；功能分析 ANDFUNCTIoNALANALYSIS0FDREB CLoNING FACToRSIN^阳ZDZ￡4^WBENZ配4^n。4M4 Supervisor：Prof．LiuWeiqun Master Candidate：WangYongliang Abstract and firethe environmentalfactorsthat bought,high-salinityfreezing major influencethe and of the of development,growthqualityplant．Inagricultural production after and inseedbedandlater of tobacco，low-temperature beingtransplanteddrought phase tobacco influencethe and of growth,which development,growthqualityformingplant, thetobacco irrevers