HA-L-Cys%2fGSH系统作为亲水性药物胃肠道给药载体的研究.pdfVIP

HA-L-Cys/GSH 系统作为亲水性药物胃肠道给药载体的研究 李小丝，俞功农，晋可，尹宗宁* 四川大学华西药学院靶向药物与释药系统教育部重点实验室，四川成都，610042 摘要 目的：考察透明质酸-L-半胱氨酸/还原型谷胱甘肽系统作为胃肠道给药载体 时药物的转运、细胞毒性及对肽酶的抑制作用。方法：合成不同巯基含量的透明 质酸-L-半胱氨酸结合物（HA-L-Cys ），MDCK 细胞模型考察以各巯基结合物及巯 基结合物/还原型谷胱甘肽（GSH ）系统为载体时药物的转运。MTT 法考察HA-L-Cys 以及GSH 的细胞毒性。考察HA-L-Cys 对糜蛋白酶和胰蛋白酶的抑制作用。结果： HA-L-Cys 对于有缓释作用；联合应用 GSH 对于模型药物有促渗作用；HA-L-Cys 与 HA-L-Cys/GSH 系统均没有显著的细胞毒性。HA-L-Cys 对糜蛋白酶和胰蛋白酶 均表现出抑制作用。 结论：HA-L-Cys/GSH 系统作为亲水性药物的载体可以兼具 缓释及促吸收作用，毒性小，并对糜蛋白酶和胰蛋白酶均有抑制作用。 关键词：巯基化；透明质酸；转运 巯基化聚合物是一类亲水性高分子聚合物，如聚丙烯酸酯、壳聚糖等在其侧 链上进行巯基化后所得的产物。具有可以长时间在局部保持较高的药物浓度，生 物相容性好，在胃肠道不被吸收, 几乎没有不良反应，对药物具有一定的缓释作用， 对部分肽酶具有抑制作用，可以保护包载于其中的蛋白多肽类药物不被酶降解等 特点。这些特点都使巯基化聚合物在口服药物给药载体的应用中有良好前景。本 文对透明质酸（HA ）进行巯基化修饰，考察其单独作为药物载体以及与GSH合用 时亲水性模型药物荧光素钠和胰岛素在MDCK单层细胞模型上的转运情况，并研 究其对于糜蛋白酶以及胰蛋白酶的抑制作用。 1. 材料与方法 1.1仪器与试剂 冻干机(Thermo Savant, Modmlyod-230) ； RF-5301PC 荧光分光光度计 (Shimadzu) 。透明质酸（分子量 140M，山东博士伦福瑞达公司）。 1.2 方法 1.2.1 合成 HA-L-Cys HA 溶液加入催化剂 EDAC 和 NHS ，调节pH 至 5 后搅拌，加入 L-Cys 溶解， 保持 pH 5 ，搅拌4 小时。冷冻真空干燥 24h ，合成高，中，低巯基含量结合物。 1.2.2 HA-L-Cys 及 HA-L-Cys/GSH 为药物载体的模型药物转运实验 AP室作为供给池分别加入各组供试液（n=3 ）750μL, BL室作为接收池加入空 2 白PBS 500μL ，37 ℃ 5% CO 孵育箱中培养不同时间，以荧光分光光度法测定荧光 素钠a含量，以考马斯亮蓝法测定胰岛素含量。计算Flu-Na及胰岛素表观渗透系数 P 。 app 1.2.3细胞毒性实验 MTT 法考察 HA-L-Cys 以及GSH 的细胞毒性，计算细胞存活率。 1.2.4 HA-L-Cys 对糜蛋白酶和胰蛋白酶的抑制作用 将糜蛋白酶分别溶解于不同巯基含量HA-L-Cys或HA 中，分别以苯甲酰-L-酪 氨酸乙酯和苯甲酰-L-精氨酸乙酯为底物测定糜蛋白酶或胰蛋白酶活性，计算活性 变化。 2. 结果与讨论 ‐ 62 ‐  2013 生物颗粒制备技术与产业化应用技术研讨会  2.1 接合物巯基含量 Ellman’s试剂法测定结合物巯基含量高，中，低巯基含量结合物的巯基含量分 别为210.58 μmol/g ，130.12μmol/g ，73.21μmol/g 。 2.2 HA-L-Cys 为药物载体的模型药物转运 图一 荧光素钠在 MDCK 单层细胞模型的累积转运曲线 图二 胰岛素在MDCK单层细胞模型的累积转运曲线 结果显示HA-L-Cys结合物对于两种模型药物均有一定的缓释作用，且随着巯 基含量的增高，Papp逐渐减小，缓释作用逐渐增强。其中结合物使胰岛素Papp下降 更快，缓释作用更加明显。 2.3 HA-L-Cys/GSH为药物载体的模型药物转运 在给药载体中加入GSH后，荧光素钠和胰岛素的透过MDCK单层细胞的能力 增强，与不含GSH 的药物载体相比，各组的Papp均增加。并且