联合药物对感染根管混合菌株抗菌作用的体外实验研究.pdf

验资料。 材料和方法 1材料 1．1药物 甲硝唑：威海迪沙药业有限公司生产，批号990623，含量99．5％ (Ⅵ，删)。 替硝唑：青岛宜利药业有限公司生产，批号990302，含量99．8％ (、删)。 环丙沙星：济南东风制药厂生产，批号990112，含量99．9％ (w／w)。 洗必太纯品：济南东风制药厂生产。 1．2菌株 金黄色葡萄球菌ATCC25923：山东省防疫站提供。 淡黄色奈瑟氏菌：济南市立四院细菌室分离、提供，经生物一 梅里埃(法国)API系统鉴定。 牙髓口}啉单胞菌ATCC33185：北京首都医科大学附属口腔医院 口腔医学研究所细菌室提供。 2方法 2．1正交试验设计将四种药物分为甲硝唑+环丙沙星组(甲环 组)、甲硝唑+洗必太组(甲洗组)、替硝唑+环丙沙星组 (替环组)、替硝唑+洗必太组(替洗组)。各组中的两种药 物定为两因素；根据四种药物已知的Mc，依照倍减倍增原 则，取其上下各三个浓度，另加。水平(浓度为0)，共计四个 浓度，定为四水平，其中O浓度水平及单一药物浓度水平作为对 照处理。选取正交表L；。(45)，进行实验安排，见表一1。 2．2药物纸片剑备 2．2．1将选定的三种抗菌药物用PBS液依次稀释，获得三个浓度 种药物均采用过滤除菌。 2．2．2用打孔机制成直径为每片6mm的园形纸片，将纸片叠加至 10片为一药纸片单位，120(2干燥灭菌2小时。依照表一l的浓度 配比，将配制好的药液等量滴入纸片单位，每种药液滴入量为 100ul，干燥后再次滴入，反复lO次．将浸过药液的纸片单位放 置于干燥的无菌平皿内，置37U恒温箱中，待干燥后备用。 23药物敏感试验 2．3．1金黄色葡萄球菌(金葡菌)药敏试验：取经18～24小时 培养的菌落3～4个，研入生理盐水中，调至细菌浊度为 0．5McF，用无菌棉棒蘸取菌液分三个方向涂布于M—H琼脂平板 上，倒置于37℃恒温箱中20分钟，待表面干燥后，贴上药敏纸 片单位。放入37℃孵箱24小时，量取抑菌环直径． 2-3．2淡黄色奈瑟氏菌(奈瑟菌)药敏试验：使用巧克力平 板，余同2．2。 2．3‘3牙髓口}啉单胞菌(卟啉菌)药敏试验-使用CDC厌氧血 平板，使用时要经过预还原，其余操作同2．2，置密封箱于3712 培养。箱内同时放有冷触媒钯10--20粒。用真空泵通过活塞抽去 箱内空气充入N2，反复两次，再灌入80％N2、10％C02：冉10％H2 的混合气体。48小时后量取抑菌环直径。 2．4统计分析 对步骤2．3．1、2．3．2、2_3_3得到的数据结果进行统计处理。将数 据输入excel数据库，计算各组药物对三种菌抑菌环的R、K值 (O水平及单一药物浓度水平不作计算)，进行直观分析。应用 SAS统计软件对数据作方差分析(ANOVA)。 表一1 L。。(45)正交设计实验安排 一4一 结 果 】、甲硝唑+环丙沙星组(见表一2) 直观分析，环丙沙星对金葡菌、奈瑟苗是主要抗茵因素 卟啉菌，甲硝唑是主要抗菌因素(R_R环)，药物浓度以 6ug／ml为好(K3K2K1)。方差分析，对金葡菌、奈瑟菌，环 丙沙星较甲硝唑作用显著(P0．01)，两种药物间交互作用不显 著胗O，01)：对口}啉菌，甲硝唑较环丙沙星作用显著(Po．01)， 两种药物间交互作用显著啤o．01)。 2、甲硝唑+洗必太组(见表一3) 直观分祈，洗必太对金葡菌、奈瑟菌及口}啉菌均为主要抗 菌因素(R洗R甲)，其浓度以0．3％时效应较好(K3K2K-)。 方差分析，对金葡菌、奈瑟菌，洗必太较甲硝唑作用显著 (P0．01)，对口}啉菌，两种药物作用均显著(P0．01)，其浓度 以洗必太0．3％，甲硝唑6ug／ml肘较好。两种药物间交互作用显 著(P0．01)。 3、替硝唑+环丙沙星组(见表一4) 直观分析，环丙沙星对金葡萄．奈瑟菌是主要抗菌因素 口}啉菌，替硝唑是主要抗菡因素(R墓Rg)，药物浓度以 0．25ug,na为好(K3K2K。)。方差分析，对金葡菌、奈瑟菌， 环丙沙星较替硝唑作用显著(P0．01)，两种药物闽交互作用不 显著(P0．011；对口}啉菌，替硝唑较环丙沙星作用显著 删0I)。两种药物闻交互作篾显著,Orc0，01)．