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细胞培养常见问题解答 问题 可能原因 建议解决方法 培养液pH值变化太快 CO2张力不对。 培养瓶盖拧得太紧。 NaHCO3缓冲系统缓冲力不足。 培养液中盐浓度不正确 细菌、酵母或真菌污染 （1）按培养液中NaHCO3浓度增加或减少培养箱内CO2浓度，2.0g/L 到3.7g/L浓度NaHCO3对应CO2浓度为5％ 到10％。 （2）改用不依赖CO2培养液。 松开瓶盖1/4圈。 加HEPES缓冲液至10到25mM终浓度。 在CO2培养环境中改用基于Earle′s 盐配制的培养液，在大气培养环境中培养改用Hanks盐配制的培养液。 丢弃培养物。 或用抗生素除菌。 培养液出现沉淀，但pH值不变 用洗涤剂清洗后残留磷酸盐将培养基成分沉淀下来 冰冻保存培养液 用去离子水反复冲洗玻璃器皿，然后除菌。 将培养液加热到37℃，摇动使其溶解如沉淀仍然存在，丢弃培养液。 培养液出现沉淀，同时pH发生变化 细菌或真菌污染 丢弃培养物。 或用抗生素除菌。 培养细胞不贴壁 胰蛋白酶消化过度 支原体污染 培养液中无贴壁因子 缩短胰蛋白酶消化时间或降低胰蛋白酶浓度。 分离培养物，检测支原体。清洁支架和培养箱。如发现支原体污染，丢弃培养物。 悬浮细胞成簇 培养液中含钙、镁离子 支原体污染 蛋白酶过度消化使得细胞裂解释放DNA 用无钙镁平衡盐溶液洗涤细胞，轻轻吹吸细胞获得单细胞悬液。 分离培养物，