泡桐丛枝植原体抗原膜蛋白抗血清制备及应用.pdfVIP

植物病理学报 ACTA PHYT OPATHOLOGICA SINICA 4 1( 2) : 161-170( 2011) 泡桐丛枝植原体 抗原膜 蛋白抗血清 的制备及应用 1 ，2 1 2 2 1 ，3 牟海青 ，周 涛 ，赵文军 ，朱水芳 ，林彩丽 1 1* 3 * 李怀方 ，范在丰 ，田国忠 ( 1 ， 100 193; 2 ， 100025; 中国农业大学植物病理学系 北京 中国检验检疫科学研究 院 北京 3 ， 100091) 中国林业科学研究 院森林生态环境和保护研究所 北京 摘要: 根据报道 的泡桐丛枝植原体( Paulow nia w itches-broom phytoplasma ，PaWB) 抗原 膜蛋白 ( antigenic membrane pro- tein ，AM P) ， DNA ， PCR amp 。 基因 的核苷酸序列设计引物 提取发病泡桐总 经 扩增并成功克隆泡桐丛枝植原体 基因 序列 ，amp 696 ， 231 ， GenBank 2 分析表 明 基因 由 个核苷酸组成 编码 个氨基酸残基 与 中登录 的 个泡桐丛枝植原体的膜蛋白核 100% 。 amp 91-604 nt ( ampd) pGEX -4T -3 ， ， 苷酸序列 同源性为 将 基因 部分序列 命名 为 克隆 到原 核表达 载体 诱 导后 经 SDS ， BL21 ( DE3 ) 。 GST 聚丙烯酰胺凝胶 电泳分析 表 明融合 蛋白 在 大肠 杆 菌 中得 到了高效表 达 以纯化 的带 标 签 的 AM PD ， PaWB-AM PD 。 ， Western 、 、ELISA 、 融合蛋白为抗原免疫德 国大 白兔 制备 了 抗血清 利用该血清 通过 印迹 点 印迹 间接免疫荧光和免疫捕获 PCR 试验均能在发病泡桐组织 中特异检测到泡桐丛枝植原体 。 关键词: 泡桐丛枝病; 植原体; 抗原膜蛋白; 大肠杆菌 Preparat ion