新蛋白质合成介导知母活性成分对M_2受体稳定性的调节作用.pdfVIP

上海 交 通 大 学 学 报 (医 学 版 ) 1324 JournalofShanghaiJiaotongUniversity(MedicalScience) Vo1．29No11Nov．2009 文章编号：0258—5898(2009)11—1324—04 ·论 著 · 新蛋 白质合成介导知母活性成分对 M2受体稳定性的 调节作用 张永芳 ， 夏宗勤。 胡雅儿 (上海交通大学 基础医学院细胞调控研究室 ，上海 200025) 摘 要： 目的 探讨知母活性成分 ZMS提高 CHOm2细胞毒蕈碱样乙酰胆碱 2型受体 (M受体)mRNA表达的机制 。方 法 体 外培养至 80％～90％融合的CHOm2细胞分为 ZMS1组 (单纯添加 1×10 mol／LZMS作用 24h)、ZMS2组 (添加 1×10～mo1／L ZMS作用24h后加入 l g／mL环己酰亚胺作用 12h)、ZMS3组 (加入 1tzg／mL环 己酰亚胺预处理 4h后加入 1×10 mol／L ZMS作用24h)，以上各组分别设立对照组 (以等体积 DMSO替代 ZMS，其他处理与相应 ZMS组相 同)。各组细胞培养基中均加 入放线菌素 D抑制 mRNA合成 ，于不 同时间点收集 CHOm2细胞 ，Real—timePCR检测 M：受体 mRNA相对表达量并计算半衰期 。 结果 与相应对照组 比较 ，ZMS1组和 ZMS2组 CHOm2细胞 M 受体 mRNA的半衰期 明显延长 ，分别为 (4．75±0．54)h s (2．13±0．23)h和 (5．43±1．13)h s(2．46±0．09)h(均 P0．05)；添加 1 g／mL环 己酰亚胺预处理的 ZMS3组 CHOm2细胞 M受体 mRNA半衰期的(3．06±0．23)h与其相应对照组的 (3．00±0．20)h比较 ，差异无统计学意义(P0．05)。结论 ZMS提 高M：受体 mRNA的稳定性需要有新蛋 白质合成的参与。 关键词 ：知母活性成分；CHOm2细胞 ；毒蕈碱样乙酰胆碱2型受体 mRNA；Real—timePCR；蛋 白质合成抑制剂 中图分类号 ：Q786 文献标志码 ：A ZM SregulationofM 2muscarinicreceptorstabilitymediatedbydenoposynthesis ofprotein ZHANG Yong—fang，XIA Zong—qin，HU Ya—er (ResearchLaboratoryofCellRegulation，BasicMedicalCollege，ShanghaiJiaotongUniversity，Shanghai200025，ChinaJ Abstract：Objective Toexplorethemechanism ofZMS regulation ofM2muscarinicreceptormRNA expression． Methods InvitroculturedCHOm2cellsweredividedintoZMS1group(treatmentwithl×10 mol／LZMSfor24h)， ZMS2group(treatmentwith 1×10 mol／LZMSofr24hand1tzg／mLcycloheximidefor12h)andZMS3group (treatmentwithlp．g／mLcycloheximidefor4hand1×10 mol／LZMSofr24h)，andtheircorrespondingcontrolgroups werealsoestablished(substitutionofZMSbyDMSO)．ActinomycinD wasaddedtoculturedCHOm2cellsofeachgroupto inhibitthesynthesisofmRNA．CHOm2 cellsampleswere taken atdifferenttime points．the relativeexpression ofM receptormRNA wasdetectedbyReal—timePCR．andhalflifeofM receptormRNA wascalculated． Results Compared with correspondingcontrolgroups，thehalflifeofM2receptormR