H5N1亚型禽流感核蛋白T细胞表位区的研究.pdfVIP

全国兽医病理学、动物病理生理学学术会议论文集 H5N1亚型禽流感核蛋白T细胞表位区的研究 Tcell in ofH5N1avianinfluenzavirus epitoperegionneucleoprotein 王群，刘光亮，肖一红，张维军，吴东来 (农业部兽医公共卫生重点开放实验室，兽医生物技术国家重点实验室， 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所，哈尔滨150001) 摘要：细胞免疫反应在病毒感染的清除中起了重要的作用。针对保守表位的记忆性T细胞可以抵抗异源病毒 的攻击。在本研究中，通过禽痘病毒表达系统对AIV 体外刺激经NP重组DNA疫苗免疫的鸡脾淋巴细胞，分别通过流式细胞术、ELISA和real．timeRT-PCR监测刺激后 GDl／96 NP(NP277．421)的羧基端存在至少1个T细胞表位。 关键词：禽流感病毒；核蛋白；细胞免疫；T细胞表位 流感病毒是负链RNA病毒，每年常以流 结合肽的预测方法。然而所有的预测方法都是 行性的形式在人类和禽类出现。自1997年首例 局限于对人和小鼠或其他的哺乳动物。因此， 人感染高致病性禽流感病毒发生后，流感病毒 造成了禽类感染病毒的T细胞表位研究的却 越来越吸引科学家和各方面的研究者的注意。 少。 现在针对禽流感病毒的免疫主要着重于病毒表 关于流感病毒特异性的CTL免疫在人和 面能引起机体中和抗体的蛋白HA和NA。在 小鼠均有研究。而且，根据人和小鼠的MHC 抵御流感感染的过程中，宿主的体液和细胞免 限制性，已经鉴定了大量的流感和禽流感NP 疫反应都很重要。有研究指出，针对内部蛋白 的T细胞表位。但是关于鸡MHC限制性的AIV 保守区的T细胞表位可为不同亚型流感病毒的 NP的T细胞表位的研究还没有报道。 攻击提供相应的保护。因此，不少研究者从交 在本研究中，通过禽痘病毒表达系统对 叉免疫保护的角度出发，探索抵抗H5N1亚型 AIV 禽流感病毒的方法，一种新型疫苗即T细胞表 株NP进行T细胞表位作图。将全长NP分为 位疫苗便应运而生。根据T细胞表位合成相应 互相重叠的6段，分别构建含有6个节段和全 肽段所制成的疫苗，可能将成为理想且安全的 长的重组FPVs(rFPVs)，使用构建的重组 亚单位疫苗。然而，以上所有这些工作都必须 册Vs体夕b*JJ激经NP重组DNA疫苗免疫的鸡 建立在MHC一限制性表位肽的筛选、鉴定等相 脾淋巴细胞，监测细胞增殖、ChlFN．丫表达和 关研究的基础上。 转录的情况对细胞免疫反应进行评价，从而确 近年来，随着免疫生物信息学的建立，分 定含有T细胞表位的区域，结果显示在AIV 子免疫学和计算机科学领域新成果的介入，以 GDl／96 及人们对表位肽与MHC．I类分子结合特性和 T细胞表位。 MHC．I类抗原递呈途径认识的不断深入，应 1．实验材料 用生物信息学的技术手段进行表位预测已经成 为可能。目前，若干种用于预测感染性疾病和 1．1质粒和病毒 肿瘤CD8+T细胞表位的方法得以建立并被广 泛运用。目前也有一些可预测MHC．II类分子流感重点实验室姜永萍副研究员惠赠；重组质 全国兽医病理学、动物病理生理学学术会议论文集 鼠抗鸡CD8+单抗购自于 粒pCAGGS—NP，由本实验室保存。 Sigma； 禽痘病毒S-FPV-017由国家禽流感重点实 验室姜永萍副研究员惠赠