深黄被孢霉Δ6-脂肪酸脱氢酶基因克隆及pGAPZαA-D6D表达载体的构建.pdfVIP

第7期 (总第 358期) 农产品加工 (学刊) No．7 2014年7月 AcademicPeriodicalofFarmProductsProcessing Ju1． 文章编号：1671—9646 (2014)07a一0046—03 深黄被孢霉 △6一脂肪酸脱氢酶基因克隆及 pGAPZ0cA—D6D表达载体的构建 葛德鹏，全 越，卢 刚， 王长远 (黑龙江八一农垦大学 食品学院，黑龙江 大庆 163319) 摘要：被孢霉属 (Mortiera!laisabellina)是 目前用于微生物发酵生产 一亚麻酸 (GLA)的主要菌种。根据 △一脂肪 酸脱氢酶基因保守区以及pGAPZetA载体的多克隆位点设计引物，上下游分别加入ECoRI和XhoI酶切位点，从深 黄被孢霉中克隆 △ 脂肪酸脱氢酶基因 (D6D)，并与pGAPZetA表达载体进行连接，经酶切与PCR鉴定重组质粒 ， 证明成功构建了pGAPZetA—D6D表达载体。 关键词：深黄被孢霉；A6-脂肪酸脱氢酶；pGAPZeLA—D6D表达载体 中图分类号：Q78 文献标志码 ：A doi：10．3969／jissn．1671—9466(X)．2014．07．014 BuildMortierallaIsabellina△6-fattyAcidDesaturaseGeneCloning andExpressionVectorspGAPZOtA—D6D GEDe-peng，QUANrue，LUGang，WANGChang-yuan (CollegeofFoodScience，HeilongjiangBayiAgricuhuralUniversity，Daqing，Heilongjiang163319，China) Abstract：MortierallaisabellinaisthemainspeciescurrentlyusedfortheproductionofmicrobialfermentationofGLA．Primers aredesignedbased on △6-fattyacid desaturasegenesconserved regionandpGAPZetA vectorcloningsites．Downstream ． respectively，introducesECoRIandXhoIrestrictionsites．From Mortierallaisabellinacloned△6-fattyaciddesaturasegene (D6D)，andexpressionvectorsconnectwithpGAPZetA，identifiedbyrestrictionenzymedigestionandPCRrecombinant plasmidwhichresultsintherecombinantexpressionvectorpGAPZetA-D6D． Keywords：Mortierallaisabellina；A 一f_a壮yaciddesaturase；xpressionvectorpGAPZetA—D6D 量的目的成为可能。本研究拟从深黄被孢霉YZ克隆 0 引言 到D6D基因，构建pGAPZ仅A—D6D毕赤氏酵母表 一 亚麻酸 (GLA)作为人体必需的不饱和脂肪 达载体 ，并在酵母 SMD1168中表达 ，为获得高产 酸，对人体发挥着重要的生理作用fl】。目前 ，市场对 GLA的酵母工程菌打下基础。 ^y一亚麻酸的需求愈来愈大，但是其来源不能满足市 1 材料 场需求 ，这样就需要找到合适的替代来源来解决这 一