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·寄生虫病·基础医学·
周期型马来丝虫CPI基因真核表达载体的构建
及DNA免疫研究
方政张赛楠陆施娟童海燕方浩徐邦生
(南通大学医学院寄生虫学教研室，江苏南通226001)
【摘要】 目的构建周期型马来丝虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂(BmCPI)基因真核表达载体pcDNA3．1一
BmCPI，并观察其在小鼠体内的细胞免疫应答效应。方法以周期型马来丝虫总RNA为模板，R1卜PCR方法扩
增出目的基因片段。与pGEM-TEasy克隆载体连接，筛选出阳性克隆，经PCR和双酶切鉴定后，亚克隆至真核
BALB／c小鼠，并设正常对照组及空质粒对照组。共免疫3次．每次免疫间隔2周。用R1．-PCR方法检测肌肉组
织内目的基因；用MTr、ELISA方法分别检测免疫小鼠T淋巴细胞刺激增殖指数和血清中细胞因子INF叫、
m-4水平。结果成功构建了pcDNA3．1一BmCPI真核表达载体。基因片段全长为621
bp，DNA序列分析与基因
库已知基因序列同源性为99％。该真核表达载体免疫小鼠后，从小鼠肌肉组织扩增出目的基因。免疫小鼠淋巴
照组(P0．05)。免疫佐荆CpG与疫苗同时注射可增强机体的免疫应答反应，表现为IFN叫水平和免疫四周后
淋巴细胞刺激增殖指数显著上升。结论pcDNA3．1一BmCPI真核表达载体能在小鼠体内表达并可有效诱导特
异性细胞免疫应答。
【关键词】 周期型马来丝虫； 半胱氨酸蛋白酶抑制剂； 真核表达载体；DNA免疫
ConstructionOf recombinantandobservationonDNA
pcDNA3．1-BmCPIeukaryofic plasmid immunity
Sai-nan，TONG Hao，XU
FANG刀jneng，ZHANGHal-yah，LUShi-juan，FANGBang-sheng．Department02
BasicMedical 226001，China
Pwasitology，Schoolof Sciences，NantongUniversi哆，Nantong
Toobservetheilnlnune in micea
elicitedBALB／c DNAvaccine．A
【AbstractJObjective responses by
the inhibitor(CPI)from clonedintovector
geneencodingcysteineprotease periodicBrug／am口c叫(丑mohryi)was
of of of
A were onthebasis CPI
pcDNA3．1．Methodscouplespecificprimersdesigned known醒!qlJencesgene
from desired were PCR fromcDNAandinsertedinto
periodic且肌以矾negenefragmentsamplitiedby technique
sub-clonedinto were ata of
cloningvector，pGEM-T，andpcDNA3．1．Miceinjecteddosage100峙recombinant
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