监测和净化难分解性有机污染物质的植物基因工程技术①.docVIP

监测和净化难分解性有机污染物质的植物基因工程技术 何业华1，吴会桃1，大川秀郎2，胡中沂1，罗 吉1，王瑞霞1 1. 华南农业大学园艺生物技术研究所，广东 广州 510642；2. 神户大学环境遗传研究中心，日本神户滩区 657-8501 摘要：介绍了植物基因工程技术在监测和净化难分解性有机污染物质方面的研究进展。生物中存在着能降解难分解性有机污染物质的酶及其编码基因，具有识别和除去难分解性有机污染物质的免疫系统、受体和响应元件。这方面的研究工作多以哺乳动物为材料，植物的相关研究还处于起步阶段。创造环境监测和环境污染净化为目标的新型植物将成为转基因植物研究的极其重要的研究方向之一。 关键词：难分解性有机污染物质；植物基因工程技术；环境污染；监测；净化 中图分类号：X173 文献标识码：A 文章编号：1672-2175（2004）02-0247-03难分解性有机污染物质（Persistent Organic Pollutants，s）是指在环境中长期残留、影响生态系统和人体健康的化学物质，主要有二（DioxinEnvironmental Hormones)和残留农药等[1]。目前，由POPs产生的土壤、水质和农产品等污染正不断扩大，已成为日益严重的环境污染问题。因此，开发防治POPs污染的新技术，已成为亟待解决的课题。 现在，POPs的监测主要是通过大范围取样和仪器分析来进行的，而仪器分析需要大量的时间和经费，因而应寻求可代替它们的灵敏度高、迅速而低廉的测定方法。另一方面，除去POPs产生的污染虽可使用物理化学和微生物等方法，但若要清除浓度极低、范围广泛的污染，就必须开发出新的技术。特别是以生物功能为基础的环境监测和环境净化的新技术开发，更容易获得人们的接受。 生物具有识别和除去POPs等外源脂溶性化学物质的特性。当POPs侵入到细胞内，就会结合到受体上，然后作用于药物代谢酶基因5(上游的响应元件，诱导表达药物代谢酶，通过该酶的作用代谢某种POPs[1, 2]。目前，人们多以哺乳动物为材料，来研究这类受体和以受体做媒介的基因诱导表达机理及其药物表达酶，而以植物为材料的研究报道还很少见，植物在这方面的功能也还不清楚。然而，通过对植物中的这类受体、以受体做媒介的基因诱导表达机理及其药物表达酶作用的研究，提高植物的化学物质响应功能和化学物质代谢功能，就有可能把具有这样功能的植物用于POPs的环境监测和环境净化。 1 环境基因：P450基因 环境基因是指参与生物与环境之间关系的基因，其典型的代表就是细胞色素P450基因。细胞色素P450广泛存在于微生物、植物和动物中，并有很多种类，其功能是参与信号物质和激素等的生物调节、次生代谢物的生物合成及外源脂溶性物质的代谢[3]。P450酶可通过羟基化、环氧化、脱烷基化和脱卤化氢等作用催化多种结构不同的物质，使许多类型化合物的化学性质发生变化，解毒或降解POPs。 植物中有多种P450基因，例如拟南芥中就有300多种P450基因存在，但其中大多数基因的功能还不清楚[4]。克隆新的P450基因，通过使它们在酵母和植物等中表达，弄清其酶功能和生理作用，了解这些基因的表达机理（特别是化学物质诱导下的表达机理），据此可开发出POPs的监测（monitoring）与净化等新技术[5]。 2 利用生物功能监测POPs 生物具有免疫系统，它对外来异物产生抗体，通过抗原抗体反应除去这些外来异物。因此，制备对残留农药、环境激素等POPs产生特异性反应的单克隆抗体(monoclonal)，借此建立测定目标化学物质的免疫化学测定法的基础技术。通过使用建立的免疫测定法，可开发出能够在ppt ~ppb水平下测定环境水样中POPs的新技术，以及快速而简便地测定环境中的残留农药和环境激素等的新技术[6~8]。对POPs具有特异性反应的单克隆抗体，分离其基因，通过在大肠杆菌中表达，还能构建和人工改变转基因抗体[6~8]。 另一方面，生物具有结合二噁英、环境激素等的受体。以基因工程方法研究受体蛋白质中与化学物质（ligand，配体）反应的区域，弄清并人为改变这些反应部位。这样一来，不仅可开发出新的测定试剂，还可通过与半导体技术的结合，开发出POPs测定仪器。 3 二噁英受体 二噁英属脂溶性物质，在环境中极其稳定，被认为是迄今为止毒性最强的化学物质。二噁英类物质侵入到动物体内后，就会结合到二噁英受体（AhR，aromatic hydrocarbon repressor protein）上，然后与Arnt（AhR的核移动蛋白, aromatic hydrocarbon repressor nuclear translocator）形成二聚体，作用于位于药物代谢酶基因5(上游的响应元件（XRE），诱