松杨栅锈菌小种特异性DNA片段的SCAR标记转换.pdfVIP

维普资讯 高技术通讯 2O07年 10月 第 17卷 第 10期 松杨栅锈菌小种特异性 DNA片段的SCAR标记转换① 余仲东② 曹支敏@ (西北农林科技大学林学院 杨凌 712100) 摘 要 用SCAR标记技术对松杨栅锈菌生理小种特异性DNA片段进行了转化和检测 研究。通过对RAPD随机引物的扩增筛选，发现随机引物BAO118扩增产生的约700bp的 DNA片段与松杨栅锈菌小种特异性相关联。将该片段进行回收、TA克隆、双 向测序和序 列整合后，序列全长685bp，3’端有BAO118随机引物序列。根据整合后序列，用Plilnel~e— leer软件设计了一对包含随机引物序列的简并引物对。用该引物对对供试菌样进行 PeR 扩增，成功获得 了松杨栅锈菌小种685bp的SCAR标记。用该标记进行田间混合孢子菌 样、单孢子接种菌样 DNA检测，均得到了685bp的DNA片段，不受寄主DNA和孢子菌系 类型的影响，具有较好的稳定性和特异性。 关键词 松杨栅锈菌，小种，SCAR标记 上 M．ept／ea不同生理专化型的限制片段长度多态 0 引 言 性(restrictionfragmentlengthpolymorphism，nr~a)标记 也有报道 【15]，并在种群分化研究中得到运用。然 松杨栅锈菌 (Melampsoralarici-populinaKleb)所 而，迄今为止，M．1arici-populina种 内小种间、遗传 致锈病是高山及北方平原地区青杨派、黑杨派及其 型间等特征性分子标记 尚未见报道，极大地限制了 杂交种杨树的重大病害 。感病品种及不合理的 对该类菌种群结构分化和流行动态监测的研究。在 栽培制度，加剧了该病的危害L5’6J。在杨树与落叶 同类的研究中，曹丽华、康振生已分别建立了小麦条 松混植的地区，松杨栅锈菌的变异频率和遗传多样 锈菌主要流行小种的序列特异性扩增区(sequence 性指数较平原杨树纯林和苗圃高 ]。欧美地区报道 characterizedamplifiedregion，sCAR)标记体系并在生 该菌种内有明显的小种分化，至今已报道了5个生 产实践中得到运用 1【6,17]。本文首次将该菌小种随 理小种 E】～Es[，，0，。曹支敏[1O,11]也相继报道了 机扩 增多态 性 DNA(radom amplifide polymorphic， 我国秦岭地区该菌3个生理小种及我国存在的5个 RAPD)连锁 DNA片段转换成了共显性的SCAR标记 在致病性上分化明显的生理小种。 并进行了验证，为进一步监测该菌小种 田间流行规 研究松杨栅锈菌的群体遗传结构及其动态，对 律奠定了基础。 揭示其毒性的变异和演化规律具有重要意义。但 由 于缺乏适宜的遗传标记，长期以来，对该菌群体分化 1 材料与方法 的研究几乎完全基于毒性调查和分析上。各国在不 同时期使用的鉴别寄主杨树存在较大的差异，相互 1．1 供试菌种与小种鉴定 间的比较有困难。同时，鉴别过程的烦琐以及环境、 表 1给出了本研究使用的菌种。表 1中除了菌 人为因素的干扰，在小种鉴别上都会造成困难。利 种A及 L1一L4外，均为单孢子菌系。菌系单孢子 用分子标记技术建立小种分子标记体系，已成国内 化及小种鉴别按文献[11]的方法。 外急需解决的问题。杨树上M．med／J／a与M．a／rc／i- 1．2 松杨栅锈菌DNA提取与RAH)分析 popu／／na的种间微卫星分