甜樱桃SSR体系的建立、优化及应用.pdfVIP

维普资讯 果 树 学 报 2007，24(6)：770～773 JournalofFruitScience 甜樱桃 SSR体系的建立、优化及应用 张琪静 一，张新忠3，李 贺 ，谷大军 ，李春敏 ，张志宏 p (’沈阳农业大学园艺学院，沈阳 110161；。辽宁省果树科学研究所 ，辽宁熊岳 115214； 河北省农林科学院昌黎果树研 究所 ，河北昌黎066600) 摘 要 ：为摸索适宜甜樱桃 的SSR反应体系，利用正交设计对 Mg“、dNTPs、引物、Toq酶和模板 DNA等 5种 因素 4 个水平进行筛选和优化 ，20 L反应体系中，Mg2、dNTPs和引物的最适浓度为 l_5mmol／L、0．2mmol／L、0．4~mol／L， 酶宜加入 1U，模板 DNA应加入 10～40ng；引物 的最佳退火温度为56．0～62．8℃。用 10对引物及建成的反应体 系对 10个供试品种扩增 ，6％的非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测 ，品种间DNA谱带多态性丰富，共有 29个等位位 点，证实该体系稳定可靠 。 关键词：甜樱桃 ；正交试验 ；SSR；反应体系 中图分类号：$662．5 文献标识码 ：A 文章编号：1009—9980(2007)06—770—04 Establishment，optimization and application of SSR system in sweet cherry ZHANGQi-jing一，ZHANGXin-zhong，LIHe，GUDa-jun，LIChun-min，ZHANGZhi-hong (1CollegeofHorticulture，ShenyangAgriculturalUniversity，Shenyang，Liaoning110161China；2LiaoningInstituteofPomology，Xiongyue， Liaoning115214China；SChangliFruitResearchInstitute，HebeiAcademyofAgriculturalandForestrySciences，Changli，Hebei066600 China) Abstract：Usingorthogonaldesign，fivefactorsincludingM ，dNTPs，primer， polymeraseaswellastemplateDNAat fourcontentlevelswerescreenedandoptimizedinordertoestablishSSRreactionsysteminsweetcherry．Theresultsshowed that1．5mmol／LM ，0．2mmol／LdNTPs，0．4~mol／Lprimer，1U polymerase，10to40ngtemplateDNAweretheop· timalconditionsinthereactionof20；xLvolume．Th eoptimalannealingtemperaturerangedfrom 56．0oCto62．8oC．Under optimalconditions，SSRreactionswerecarriedoutwith10cultivarsofsweetcherryusing10pairsofprimem．PCRproducts weretestedbyelectrophoresisusing6％ nondenaturedpolyacrylamidegels．Th eresultsrevealedhighp0lymorphism with29 allelesinwholewhichdemonstratedthatthereactionsystem establishedinthisstudywasstableandreliable． Keywords：Sweetcherry；Orthogonaldesign；SSR；Analysissystem 甜樱桃fCerasusav