实验七、细胞器分级分离.pptVIP

细胞器的分级分离 高等植物叶绿体制备 动物细胞线粒体的分离 实 验 目 的 学习分离细胞器的一般原理及方法 实验原理 细胞内不同细胞器的比重和大小都不相同，在均匀密度介质中不同离心力下沉降的细胞器组成不同或在梯度介质中离心后分布于不同密度层，根据这一原理，差速离心法或密度梯度离心法就可将细胞内各种组分分离出来。 分离流程： 破碎组织（匀浆或研磨）－差速离心或密度梯度离心分离细胞器－结果检验分析 匀浆（Homogenization） 低温条件下，将组织放在匀浆器中，加入等渗匀浆介质(即0.25mol／L蔗糖一0.003mol／L氯化钙)进行破碎细胞使之成为各种细胞器及其包含物的匀浆。 差速离心分级分离(Fractionation) 由低速到高速离心逐渐沉降细胞器。 先用低速使较大的颗粒沉淀，再用较高的转速将上清液中的小颗粒沉淀下来。 密度梯度离心（density gradient centrifugation method ） 亦称平衡密度梯度离心法。 用超速离心机对小分子物质溶液，长时间加一个离心力场达到沉降平衡，在沉降池内从液面到底部出现一定的密度梯度。 若在该溶液里加入少量大分子溶液，则溶液内比溶剂密度大的部分就产生大分子沉降，比溶剂密度小的部分就会上浮，最后在重力和浮力平衡的位置，集聚形成大分子带状物。 分析 分级分离得到的组分，可用细胞化学