酶的分离纯化46996.pptVIP

酶的分离纯化与制剂 一酶分离纯化工作的基本原则酶分离纯化工作包括三个基本环节：1抽提（extraction） 2纯化（purification） 3制剂（preparation）。 抽提是要将酶从原料中抽提出来作成酶溶液； 纯化则是要将酶和杂质分离开来，或者选择地将酶从包含杂质的溶液中分离出来，或者选择地将杂质从酶溶液中移除出去； 制剂则是要将纯化的酶作成一定形式的制剂。 为了能够成功地进行酶的分离纯化，应注意以下问题。 1防止酶变性失效 2选择有效的纯化方法 3酶活性的测定贯穿纯化过程的始终 二酶的抽提 一预处理和破细胞 二抽提 1pH 首先应考虑的是酶的酸碱稳定性，选择的pH不能超过酶的稳定范围。 2盐 抽提液一般采用等渗盐溶液，最普通的有0.020~0.050mol/L的磷酸缓冲液，0.15mol/LNaCl溶液等。 3温度 抽提温度一般控制在0~4℃. 三浓缩 1蒸发 2超过滤 3胶过滤 4反复冻融 三酶的纯化原理与方法 1根据溶解度的不同进行的纯化 A盐析法 B有机溶剂沉淀法 C共沉淀法 D选择性沉淀法 2按照分子大小进行的纯化 A胶过滤（层析）法 B 超过滤法 C超离心法 三根据电学解离性质进行纯化 A吸附层析法 B离子交换层析法 C电泳法 D聚焦层析法 E快速液相层析法 F疏水层析法 四利用专一亲和作用进行纯化 1亲和层析法 2亲和电泳法