发菜蛋白质组双向电泳技术建立及优化.pdfVIP

西北植物学报 ,2009 ,29 (8) :1550 - 1556 Act a B ot . B or eal. Occi dent . Sin. 　　文章编号 (2009) 发菜蛋白质组双向电泳技术的建立及优化 1 ,2 2 1 2 1 梁文裕 ,王 　星 ,焦广飞 ,张喜娟 ,陈　伟 ( 1 福建农林大学 生命科学学院 ,福州 350002 ;2 宁夏大学 生命科学学院 ,银川 75002 1) ( ) 摘 　要 :为建立适用于发菜 N os toc f l ag el l if orme 蛋白质组研究的双向电泳技术 ,对发菜蛋白质的提取 、裂解 、上 样量 、IEF 及 SD SPA GE 电泳等关键步骤进行了优化 ,结果显示 :发菜蛋白质主要分布在 p H 4～7 范围内,采用改 良 TCA 法可提高提取液中蛋白质的含量和双向电泳图谱的分辨率 ,裂解液含 60 mmol/ L D T T ,24 cm IP G 胶条上 样量 1. 5 mg 时不仅提高了蛋白质的溶解性 ,而且改善了双向电泳的分离效果 ,得到近 800 个蛋白点 ,且蛋白点清 晰 , 图谱分辨率较好 。采用优化后的双向电泳体系提高了发菜蛋白质双向电泳的分辨率和重复性 ,建立起一套适 用于发菜蛋白质组分析的双向电泳方法 。 关键词 :发菜 ;双向电泳 ;蛋白质组学 中图分类号 :Q816 文献标识码 :A Establ ishment and Optimization of Twodimensional Gel Electrophoresis f or Proteome of N ost oc f l a gel l i f or me L IAN G Wenyu1 ,2 ,WAN G Xing2 ,J IA O Guangf ei1 ,ZHAN G Xij uan2 ,C H EN Wei1 ( 1 School of Life Sciences ,Fuj ian Agricult ure and Forest U niver sit y ,Fuzhou 350002 ,China ;2 School of Life Sciences ,Ningxia U niver sit y , Yinchuan 75002 1 ,China) Abstract :In or der to e st abli sh a t wodimen sio nal gel elect rop hore si s (2DE) p rotocol for p rot eo mic st udy of N os toc f l ag el l if orm e ,we op timized ext racting met ho d of tot al p rot ein ,ly si s met ho d ,loadin g quantit y and t he key p roce ss of IEF and SD SPA GE. The re sult s showed t hat t he p rot ein spot s were di st ribut ed mainly wit hin t he range of p H 4～7 . Imp roved TCA met ho d wa s obviou sly imp rove t he p rot ein cont ent an