莱茵衣藻外源基因转化和表达的研究论文.pdfVIP

莱茵衣藻外源基因转化和表达的研究1 刘晓磊 阎光宇 王金喜 昊双秀+ 上海卿范大学生物鬣，上海黼200234 捅萋， 蘩茵蔽藻阻篡特韵的生物学特性和遗千蕈背景成为迓令生街器巾嚷一艟独波地对黧竣、叶燎体及线毂件分 嬲避行蒸阏转化的横式物种。近年来，利用畿藏作为新溅生物度戍礴泉生产药物鬣自翻生物翩巍豹研究受到越来 越辫荧潍。深入研究箕蕊镄转化体系豹尊昏健翻裘选调控椒煺，对稠用箕构建赢效燕麴反成器氛有羹婺意义。本文 姻蚋了霰藻橇转化和叶燎俅转他的照理、将点及寝遮调控帆理。并对菇成用岛发凝趋势作了分析。 关键铘t 农藻；外源基闭转化；裘选调投机理t生物反成嚣 徽藻在地球燕物耀中占霄熏攥的嫩态地撼。垒碟约50％的有机碳鼹豳微潍褥定，许黟徽藻的天然产 物鼹有珍资的药掰价值鞠食用价值，一犊微藻逶是研兜擞龠代谢机理的模式物种¨J。随着人爽对暖药、 食晶、能源相琊境需求的不断增拥，馊穆利用蒸因工程乎段构建新型生物度艨嚣生产高价值天然产物的 褥求也不断增斓，微藻因其代谢特点谳戒为继太脑抒藕、酵母、动撼物细胞薄传统生物反巍器之后的叉 …研究热杰。豳髓已缀I臻缕建藏r绿簇(秭肠掰腑埘口黼，，脚Jl口抛砌)、硅藻(瑚d瑚妇如缸彤舭。朋融l小)、 因为葜细胞结构特觫、培葬容易、生长速度抉、遗传学背景清晰朝转化释易簪原因而成为研究基因功能、 外源綦阏表达和生物制氯的新兴横式物种，被称为“绿色酵僻”威“毙含醇鼯”，目前已分剐建立『：『它的叶 绿体、檄及线粒体的转化体Il羽。举文将就策蔼农藻作为外源基因袭选体系的优点、其核和时绿体转化的 原联期方法以殷基因表达调控等宵面的研究进展做一炼述，以期对从攀此方两研究的人员嚣所借浆。 1 莱茵衣藻作为外源基因表达体系的优点 约lO赫m，紧羁占躁嫩质膜肖鼠仅商一个犬型杯状叶绿体，文细胞憩体积40·‰60％，包嘲瓣鼬腌椴；细胞 预郝篱两搬鞭毛，侧谳商一个戆光佟用的眼点；既能光含翻箨生长，义能依赖乙黢熊异莽生长；生长速 缱快，细胞毅鬣倍增时间为5～6h，可雀斑时间内获褥犬嫩遗传蘑代进行遗传分析；培养条件仪要求蜜 也睫畿1％～2％璩朦的闯体爝漭撼上生长，并且能形成单克辫：邋过调整光．暗周期，可使农蒺细胞分裂 达到网步化p一1。这蹙特点使褥蘩蘸衣藻非常辫舄进行寓验撩作。烫篁簧的邂莱荫衣藻的拨基因缎、叶绿 钵基因组和线敞体綦因组测摩工作已经究溅，数攒公名殛鲰：姐苤醴辔璺；i畦霉￡鲷丛糊幽三氲龃￡趣隧。 这给设计外源基因转化和袤选蜜骏带米随大蠢便，匣蛾予了策菌农藻作为外源熬因表达体系的新型梭式 物种的优热。 邋过建藏策荫农藏核转{乜体累。町以_i湃究鞭毛的铭构岛助能、轴缝岛纂体功能、感光性勾趋光性、 拨撼因对光台作用影响、纲魏阁嬲与细胞调亡镰分予机琏溯。其叶绿体和线糙体转化体系的建崴在研究 光含炸膈基因、叶绿体生物发燃和线粒体功能巾扮演燕要衔色p√卅。尤其是蒺荫衣藻的叶绿体体积较大。 熊近豚漱礁膜．释翁转化。没商核转化的“僻鬻效麻”现藏．其遗传袭达方式兼有琢核舷物和襄核嫩物的 特点，能搿效表达柬翻驻饺生物和真核生物的蒸因，能藏确转录、翻译和届期加I结掏复杂的真钦生物 揍盒项目t t海市救肖鎏爨念逸拨培莽优秀脊警裁卿科研专域萋金(R翌5醣)，上海师范太学博士翮劝经费(酆06)。 熬因昏】；而且农藻l冲绿体其宵母蒸遗传特征，使转萋因藻椿稳定遗传f地1¨。另外，农藻代谢产物笼毒， 培养成本低廉，能避免农药鞠环境污染，这些特点掷表现出举网于大脑栉荣、辩母和动橇物细胞藏棒的 忧势，因弼使褥蕹荫农藻的外灏撼因转化寝达体系的讲究受剿越来越多基桃呤冀+1五131。 2农藻外源基因转化的基本原理 2．1衣藻核基因组转化的原理 含方式赘合到农溅核染色体DNA的断裂缝。有撒导措出线性外濒E脯A比环状外源BlNA的整台效率附”J。 这种整含方式常常弓l起程攘含点附近的基因发生5—20妯缺失、塑缀和擗能糯藩。所以埘外溯Ⅸ姐避挂 线性化的时候切割点应该邋璃谖撼因稚翻译区的5’端和3’端。义因为邈随机整合矗式，外源簿因转入霞 藻核中湘予“位置效巍”问题蒯常出现“蕊因沉默”现簿，使外源纂因袭在梭巾的达掇远远低予在叶绿体中 的袭达蜃，缎是珂利用橇转化声嫩的插入潇变米进行必要基因或非必要基因(脚es始嘶叠lge酏)的功能 研究【9溯。 2．2衣藻时绿体基因组转化的原理 蘩荫衣藻有一个靠近艨嫩磺艨的火獭：l；I：状卧绿体，掰以与多藤小的高等植物细胞雌绿体椴比．其肖 转化释晶斓遗传稳定的特点。策荫农溅叶绿体基因