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基因治疗及其研究现状 发表时间:2006-2-28 22:00:09???? 文章来源:中学生物教学 :宋婕 ????浏览次数: 双击自动滚屏 ? ????21世纪是生命科学和生物技术的世纪，随着转基因技术、反义核酸技术、RNAi技术等基因操作方法的发展与完善，采用分子生物学手段治疗遗传疾病、肿瘤、心血管疾病和代谢性疾病等已成为本世纪的一大热点领域。1990年，第一例基因治疗的成功使得利用基因工程治疗人类疾病成为现实。目前，基因治疗已成为一项跨世纪工程，越来越多地受到科学界的关注。本文将基因治疗及其研究的现状综述如下：1??基因治疗简介1．1??基因治疗的概念(gene?thera-py)，是指通过基因转移技术将外源正常基因直接导人患者病变部位的靶细胞，通过控制目的基因的表达，抑制、校正、替代或补偿缺陷或异常基因，从而恢复受体细胞、组织或器官的正常生理功能，进而达到治疗疾病目的的一种新型医疗方法。从治疗方式来看，基因治疗不同于基因工程药物治疗，但就实际效果而言，它是通过导人体内的基因产生特定的生理活性分子(如某些调节因子)来起作用，即相当于向病变部位导人一个给药系统，因此，可将导人的外源基因看作广义的基因????药物。(somatic?cellgene?therapy)是应用体细胞基因工程技术将外源基因导人人体，进而校正或补偿该病人的遗传缺陷。生殖细胞基因治疗?(germ—linegene?therapy)是将外源正常基因转入精子、卵子或受精卵中，矫正有缺陷的基因而达到治疗遗传病的目的。从理论上讲，生殖细胞基因治疗既可治疗遗传病患者，又可使其后代不再患这种遗传病，是一种使遗传病得到根治的方法。1．2??基因治疗实施的具体环节??及获得，目的基因的导入，外源基因在体内的高效表达等阶段。??1。2。1??特异性外源基因的获得。随着分子生物学和基因重组技术的发展，基因获取的手段也逐步成熟。目的基因的获取必须遵循以下原则，即保留基因自身的编码区、调控区和特殊启动子等元件，以保持基因结构的完整性。目前，获取目的基因的主要方法有利用分子生物学手段分离与克隆目标基因，如利用酶切或逆转录等方法，或采用人工手段合成目的基因片段。1。2。2??靶细胞的分离与体外培养吣靶细胞(又称受体细胞)是接受外源基因的细胞，来源于被治疗的对象。在基因治疗的实施过程中需要从病人体内选取合适的靶细胞进行体外培养、增殖，以获褥足够的靶细胞来接受外源基因。合适的靶细胞是基因治疗成败的关键之一，选择时应考虑疾病的性质和部位，取材的容易程度，是否便于体外培养和遗传操作，是否有可行的转移方法等方面。目前，T淋巴细胞为较常用的靶细胞。近年来，新生儿脐带血中的干细胞被用作靶细胞，成功地治疗了婴儿的ADA缺陷的SCID病。随着生物技术的进步，其他类型的细胞如骨髓细胞、角质细胞、肝细胞、皮肤成纤维细胞和血管内皮等也越来越多地用于基因治疗。????1．2．3??目的基因的导人方式。基因治疗时应选择适当的基因转移方法，将外源基因转移到受体细胞核内，使其在染色体上整合或成为不整合的游离基因随着各种动物基因转移技术相继问世，目的基因导入的方法也越来越多。化学方法有：磷酸钙沉淀法、DE-AE葡聚糖介导转染法、脂质体介导法等；物理方法包括：电脉冲穿透法、显微注射法、基因枪法等；生物学方法主要是以病毒或质粒为载体进行基因转移。如逆转录病毒(Rt)、腺病毒(Ad)、疱疹病毒(HSV)和腺病毒相关病毒(AAV)载体等。????1．2。4??目的基因的表达与调控。到目前为止，外源基因导人并在靶细胞中表达已获得成功，但外源基因的表达量与正常生理水平仍有较大的差距。因此，外源基因的表达与调控是目前基因治疗的难点与研究热点。目前人们正在通过定点插入以及连接强启动子等方法来提高导人基因的表达水平。1．3??基因治疗的策略1．3．1??置换。指用正常的外源基因来取代体内的突变基因。1．3．2??修正。指导人的外源基因通过同源重组，特异性原位修复基因缺陷，在这种情况下受体细胞的基因组不发生改变。1．3．3??添加。即将正常的外源基因导人受体细胞，以弥补体内缺陷的基因成分或使其表达。1．3．4??抑制。指通过导入外源基因，使得病原基因的表达受到抑制。采用反义核苷酸技术(包括反义DNA、反义RNA、核酶RNA)及RNAi等进行基因治疗就属于这种类型。2??基因治疗的现状及应用2．1??国内外基因治疗的发展状况1967年，随着1980年外源基因导入小鼠试验的成功，科学家开始了基因治疗的尝试。直到1990年，美国国立卫生研究院(NIH)的BlaseRM和AndersonV,rF将腺苷酸脱氨酶(ADA)基因导人一位由于ADA基因缺陷导致严重免疫缺损的4岁患者的淋巴细胞中