艾滋病实验室检测新技术.pdf

艾滋病实验室检测新技术 蒋岩 中国CDC性病艾滋病预防控制中心 二十一世纪第二届全国性病暨皮肤病学术研讨会 目的 方法 监测 感染检测 抗体检测(EIA/PA/RT) 检测策略 窗口期检测 抗原检测,核酸检测 pooling RT-PCR 诊断 感染诊断 WB 检测策略 近期感染诊断 STARSH方法 治疗评价 CD4/CD8测定 流氏仪检测 显微镜法 病毒载量测定 NASBA, b-DNA,RT-PCR 耐药性检测 基因型,表型 窗口期检测 抗原检测 核酸检测 Pooling RT-PCR方法 窗口期的范围 定义依据 时间长度 抗体检测 3-6个月 新的EIA试剂可以缩短至14-21天 抗原检测 1-2周 第四代抗原抗体检测试剂可以 使窗口期比第三代抗体试剂缩 短4-5天 核酸检测 5-11天 抗原检测 P24试剂盒,第四代EIA试剂(1997年在欧洲正式批 准用于血液筛查) 每一个HIV粒子含有1200个p24抗原分子=0.048fg 每一个HIV粒子含有2个RNA拷贝,如果病毒载量测 5 定结果为400拷贝/ml, 即等于有2.4X10 个分子 =0.0096pg p24抗原/ml,800拷贝/ml, 即等于有 5 4.8X10 个分子==0.019pg p24抗原/ml 目前最敏感的抗原检测试剂盒的检测阈值为0.01pg/ml 抗原在血清抗体阳转前2-18天既可以检测到 样本(血清/浆) 中的p24抗原包括游离的抗原和病毒粒子中 的抗原 EIA测定的抗原浓度(F):病毒RNA拷贝数推算的抗原浓 度(A)=0.16:2900 样本号 EIA(Cutoff) EIA(pg/ml) RNA拷贝/ml p24pg/ml F/A 1 3.1 0.1 1,400 0.03 3.1 2 4.7 0.16 3700 0.09 1.8 3 45 1.5 1100 0.03 56 4 320 11 80000 1.9 5.6 5 68 2.3 40000 0.96 2.4 6 22 0.73 190000 4.5 0.16 样本经过预处理,破碎病毒粒子后将有利于p24抗原的检测 病毒RNA检测 第一次病毒学症高峰时间大约在感染后4-11天 病毒RNA检测方法:NASBA,RT-PCR,b-DNA 在高度怀疑有原发感染时,且经抗体检测之后 抗体检测阴性或不确定,有高危行为史或暴露