玉米细胞质HSC70的纯化及其与钙调素结合特性与研究.pdfVIP

3 型!坐堂!!鲞型些要!垩!!塑丝些壁!!篁塑塑鲞塑堕宣堑堡竺墨——————一 缩写词 Bl争Ills： 2．bis【2．I{ydroxyethyl】amino一2-【hydroxynlethyl】l，3propanedioI bis【2lIydfoxyethylliminotris【hydroqmethyIlmeth∞e； a|bumin BSA：Bovineserum CaM：Calmodul11 Protein CaMBP：Calmodulin Binding DTT：Dithioery¨1ritol Acid EGlA：EthyIeneGlycoI-bis【p-animoethyeIller)一N，N，N，N’一tetracetic HSC：HSP Pro{ein5 Cognate Shock l{SE：HealElenlen【 I ISF：HeaIShock Facte’ Tmnsc“ption ProIeins HSPs：HeaIShock Midium． MS：Murashige孤dSkoog’s killase NADK：NAD NC：Njtroce¨ulose PDE：PhosphodiesteI‘ase SDS·PAGE：Sodiium geleletrophoresjs dodecylsulrate—polyacrylamide acid． TES：N_tris【HydroxymethyUnlethyl2一aminoethanesulfonic 硕l：学位论文 中文摘要 川A1P～琼脂糖亲和层折柱和DEAE一52离子交换柱从悬浮培养的玉米细胞中纯化r胞 合，但以5mM 米I{sc70在一定范围内能竞争一肚抑制依赖丁c枷的NADK的活性。通过实验证明钙调素能抑 制I{sc70的ATP酶活性，以上事实证实植物中Hsc70为一c枷结合蛋白。 根据动物IISc70分子中与C枷结合的一段氨基酸序列比较可知，玉米、番茄、豌豆、 拟南芥等HsP70或Hsc70分子的N端ATP结台位点附近都有一段高度保守的由21个氨基酸 组成的序列，分析可能足caM结合区域，人工台成了这段21个氮基酸的小肽。通过实验证 明，该小胩能抑制依赖]：caM的PDE酶的活性，适量的c枷存在F，随着小肽加入量的增 ca” 人．可抑制PDE酶活性至基础活性；该小肽还能抑制依赖rca^I的NADK的活性。1mM F，纯化的caM与小肽在25℃下反应一段时间，进行10％的聚丙烯酰胺凝胶天然电泳，结 果显示：同单独caM相比，与小肽结合后的caM的迁移率发生明显改变。表明人丁合成的 Hsc70中的caM结合序列能与CaM结合。 总乏，所有的试验都说明玉米胞质llsC70为钙调素结合蛋白，而且钙溺素与llSc70的 结台位点在I{sc70的N端的ATP结合位点附近，即：26卜28l氨基酸序列处。 关键词：玉米细胞质，热激蛋f!!；j70，c洲结合蛋自 孙旭彤：玉米细胞质Hsc70的纯他及其‘j钙调紊的结☆特性研究 5 Abstract Themaize 70kDstress been a cyIosolic pmtein(Hsc70)haspurmedby