定点突变改变近平滑假丝酵母SCR_催化苯乙酮衍生物底物谱.pdfVIP

Research Paper 研究报告 微生物学报 A cta M icrobiolog ica Sinica 5 1 (6 ):783 － 788 ;4 June 20 11 ISSN 000 1 － 6209 ;CN 11 － 1995 / Q http :/ / journals． im ． ac ． cn / actamicrocn 定点突变改变近平滑假丝酵母 SCR Ⅱ催化苯乙酮衍生物底 物谱 * ， ， ， 张波涛 张荣珍 王珊珊 徐岩 ， 2 14 122 江南大学生物工程学院教育部工业生物技术重点实验室 无锡 :【 】 ， (SCR ) 摘要 目的 通过定点突变技术 改变近平滑假丝酵母短链羰基还原酶Ⅱ Ⅱ 催化苯乙酮衍生物的功 ， 、 。【 】 能 为数种手性芳香醇的生产提供一种高效 安全的新型制备方法 方法 通过氨基酸序列和蛋白结构比 ， SCR E228 ， Escherichia coli 对的方法 选择 Ⅱ的底物结合域中关键氨基酸位点 实施突变 构建相应的突变株 BL2 1 / pET28a-E228S ; ， 。【 】 以苯乙酮衍生物为底物 对突变株的酶活和生物转化功能进行了分析 结果 酶活测 : E ． coli BL2 1 / pET28a-E228S 2 - 25 % 定结果表明 突变株 催化原始底物 羟基苯乙酮的酶活仅为原始酶活的 左 ; 、4 - 、4 - 7 － 20 。 E ． coli BL2 1 / pET28a- 右 而催化苯乙酮 甲基苯乙酮 氯苯乙酮的酶活是突变前的 倍 突变株 E228S 2 - ， (S )- 10 % ， 、4 - 、 生物转化 羟基苯乙酮 获得产物 苯基乙二醇的得率不超过 而以苯乙酮 甲基苯乙酮 4 - ， 99 % ， 80 % 。【 】 氯苯乙酮为底物时 生物转化产物光学纯度维持在 得率高达 以上 结论 对底物结合域中的 ， SCR ， ， 关键氨基酸实施突变 提高了 Ⅱ催化苯乙酮衍生物的底物广谱性 拓展了该酶的生物功能 为理性改造 短链羰基还原酶的不对称还原催化功能和手性芳香醇的制备提供了新型途径。 : ， ， ， ， 关键词 定点突变 短链羰基还原酶Ⅱ