第二章二维核磁共振谱.pptVIP

第五章、色 谱 内 容 第一节、色谱法的起源 第二节、色谱法分类 第三节、色谱图谱 第四节、色谱分析的基本理论 第一节、色谱法的概念 色谱法又称色层法、层析法，是用于多组分有机混合物的 　一种高效分离技术。 　　　色谱分离分析技术具有选择性好、分离效能高、灵敏度高、 　分析速度快等优点。 　　 　　　色谱分离技术已逐步实现仪器化、自动化、高速化，并从 　分离手段发展到分析手段，应用范围不断扩大，分离的对象早 　已不限于有色物质，但“色谱法”这一名称一直被沿用。 　色谱法与现代新检测技术和计算机技术相结合，已广泛食 　品质量与安全等的有关工作， 　如样品中农药残留量的测定、农副产品分析、食品质量检 　验、生物制品的分离制备等。 一、色谱法的起源 　　 　　1906年，俄国植物学家茨维特首创了这种分离技术， 他把植物叶绿体色素的石油醚浸渍液 倒入一根装有碳酸钙吸附剂的细直玻 璃柱中，再加入纯石油醚，任其自由 流下，原混合物开始被分离成不同颜 色的谱带(色素的分离)，且以不同速度 通过柱子，然后按谱带颜色对混合物 进行鉴定分析。 茨维特把这种分离结果称为色谱图， 把这种分离方法命名为色谱法。 色谱法是基于混合物各组分在两相(固定相和流动相) 之间的不均匀分配进行分离的一种方法。不均匀分配的先 决条件，是各个组分对两相亲和力的不同和向两相不均匀 分配的可能性。由于混合物中各组分对两相的亲和力有差 异，它们穿过固定相的流动速度(或在固定相中的滞留时间) 就有不同，从而得到分离。 流动相为气体的色谱分析法称为气相色谱法(GC)； 流动相为液体的色谱分析法称为液相色谱（LC）。 分为吸附柱层析、离子交换层析、 分配层析 、 凝胶层析 第二节、色谱法分类 一、吸附柱层析：吸附与解吸是吸附柱色谱法的理论基础。 在柱色谱分离过程中，用一定的溶剂系统洗脱柱子时 ，由于溶剂(洗脱剂)与混合物里各组分争夺吸附剂的活性 表面，发生吸附与解吸过程，解吸出来的组分与溶剂始终 存在着对吸附剂的竞争吸附，因此吸附与解吸始终贯穿整 个柱色谱过程。 由于不同化合物结构及性质上的差异，在吸附剂上的 吸附与解吸性能是不同的，洗脱剂对它们的洗脱能力也是 不同的，被分离物与吸附剂表面分子的相互作用被吸附。 吸附过程无选择性，吸附与解吸附过程可逆，但吸附 强弱和先后顺序都基本遵循“相似相吸附”的经验规律。 常用极性吸附剂有硅胶、氧化铝。 1、聚酰胺吸附层析法 属于氢键吸附，聚酰胺通过分子中的酰胺羰基与酚 羟基，或酰胺键上游离胺基与羰基形成氢键缔合而产生吸 附。吸附强弱则取决于各种化合物与之形成氢键缔合的能 力。 在含水溶剂中有如下规律： ①形成氢键的基团数目越多，则吸附能力越强； ②形成分子内氢键的化合物，吸附相应减弱。 ③分子中芳香化程度高，则吸附作用强；反之则减弱。 聚酰胺吸附层析特别适合于酚类、黄酮类化合物的制 备分离。 2、大孔吸附树脂法 是20世纪70年代以来发展起来的有机高聚物吸附剂， 具有较好的吸附性能。它的化学结构与离子交换树脂类似。 它的吸附作用是通过表面吸附、表面电性或形成氢键。 大孔吸附树脂多为白色的球状颗粒，粒度多为20—60 目，通常分为非极性和极性两大类。根据极性大小尚可分 为弱极性、中等极性和强极性。 目前常用的为苯乙烯型和丙烯腈型。它的理化性质稳 定，不溶于酸、碱及有机溶剂。对有机物的选择性较好， 不受无机盐类及强离子低分子化合物存在的影响。 3、吸附柱色谱的原理 吸附柱色谱是将待分离混合物样品均匀地加在装有吸 附剂的柱子中，用适当的溶剂冲洗，由于吸附剂对各组分 吸附能力不同，各组分在柱中向下移动的速度不同，吸附 力最弱的组分随溶剂首先流出，通过分段定量收集洗脱液 而使各组分得到分离。柱色谱装置如图。 二、 离子交换色谱 以离子交换树脂或表面涂有液体离子交换树脂的固体 颗粒为固定相，装在柱中，以水或含水溶剂为流动相，使 样品溶液流过交换柱