共表达p53及siRNA—VEGF质粒的构建及其在PC-3细胞中的表达.pdfVIP

中国实验诊断学 2010年3月 第 14卷 第 3期 ·—- — — 337 —-—·— 文章编号：1007—4287(2010)03—0337—04 共表达p53及 siRNA—VEGF质粒的构建 及其在 PC一3细胞中的表达 刘亚男，邵月婷，赵 丹，汲 坤，李晓洁，邵 晨，王 波，张 爽，李 馨，李 扬 ，赵雪俭 (_IL林大学白求恩医学院病理生理教研室 吉林大学前列腺疾病防治研究中心，吉林 长春 130021) 摘要 ：目的 构建可同时表达野生型053(wt—D53)及 siRNA-VEGF的重组真核表达载体用于激素非依赖性前列腺 癌的联合基因治疗。方法 利用亚克隆、T_A克隆和PCR技术合成并构建 pcDNAB．1-D53，siRNA—VEGF，p53／siRNA— VEGF及siRNA—scramble重组质粒。以脂质体法将上述重组质粒转染至 PC．3细胞 ，PCR鉴定 053，VEGF基因的表达。 结果 克隆出wi-053全长及带有 U6启动子的siRNA—VEGF序列 ，经 DNA测序证实序列正确，通过连接成功构建上述 五种真核重组表达载体。转染细胞48h后可见GFP(siRNA．VEGF组)明显表达；RT-PCR检测到转染后PC．3细胞中at— r63表达增强，而VEGF表达下调。结论 p53／siRNA—VEGF共表达载体的构建及其在PC．3细胞中的表达为进一步研 究wt—p53和VEGF双基因对人前列腺癌作用机制为治疗作用奠定了基础。 关键词：053；VEGF；RNAi；前列腺癌 ；质粒 ‘ 中图分类号：R737 文献标识码：A Constructionandidenlificationofvectorsell!c0I‘iIIgbothwidetypepS3proteinandsiRNA-VEGF OilPC-3cells LIU Ya- ， SHAOYue-ting，ZHAODan，eta1．(DepartmentofPathopyisiology，NormanBethuneCot~geofMedicine， inUnivemity， Changchun130021，China) Abstract：Objective Toconstructtherecombinantvectorsthateoexpresswt一053andsiRNA—red．Methods Thesubcloning， T-Acloning，andPCRtechniquewereusedtoconstructtherecombinantvectors，namedpcDNA3．1-053，siRNA-vegf，p53／siRNA—ved andsiRNA—scramble．Results Therecomb inantexpressionvectorsmentionde aboveweresuccessfullyconstructed．Conclusion The successfulconstructionofrecombinantvectorscanestabhshafeasibilitytofurtherexplorethefunctionsofspecificgenesinpc一3cells withRNA itechnique． Keywords：p53；VEGF；RNAi；prostatecancer；plasmids (ChinJLab脚 ，2010，14：0337) p53和血管 内皮生长因子 (vascularendothelial LipofectamineTM2000购 自Invitrogen公司；OmegaE． growthfactor，VEGF)是与肿瘤 的发生和生长密切相 Z．N．A．TMPlasmidMiniKit购于mO ega生物技术公 关的基因，大多数的肿瘤都存在VEGF和突变型p53 司；真核表达质粒 pcDNA3．1和人激素非依赖前列 基因的高表达。在 以往的研究 中单独针对 wt—p53 腺癌细胞系