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应用一种新的毛细管HPLC-ICP-MS 接口进 行富硒酵母中含硒蛋白的鉴定 应用简报 食品添加剂 作者 Juliusz Bianga 和Joanna Szpunar Laboratoire de Chimie Analytique Bio-inorganique et Environnement Pau, France 前言 饮食是人体硒 (Se) 的主要来源，该必需元素的摄入主要取决于食品中的硒含量 和所消耗的食物量。由于许多国家农产品中硒的含量很低，所以硒缺乏成为了一 个值得注意的问题。人们已经开发了许多提高人体硒摄入的食品添加策略；富硒 酵母就是人和动物添加剂最常用的硒来源之一。 评估硒是否充分不仅需要了解硒总含量，而且还要了解各种形态硒的含量。但 到目前为止，大部分研究都仅限于针对占总硒 12-20% 左右的水溶性酵母成分。 酵母的不溶性硒组分很多尚未被发现，表征这类主要组分的工作非常少，其中 Chassaigne 和 Chéry [1] 曾研究过酵母蛋白的硒特异性激光消融(LA-) ICP-MS 指纹谱， 等人 曾用实验室自制的 表 1. HPLC 洗脱程序 Tastet [2] nanoHPLC- ICP-MS 接口对富硒多肽进行了硒选择性检测。在常规方法 步骤 洗脱液 (%B) 时间 （分钟） 中，通过测定总硒代蛋氨酸含量 （含硒蛋白含量）来评估 1 2 0–2 2 2–5 2–5 富硒酵母的质量。 3 5–25 5–35 本研究提出了一个 ICP-MS 辅助的蛋白质组学方法，用于 4 25–40 35–40 鉴定富硒酵母中的含硒蛋白。采用双向凝胶电泳分离不溶 5 40–97 40–45 性含硒蛋白。使用 LA-ICP-MS 找出分离后的含硒蛋白斑 6 40–97 45–50 点，经切割后，用胰蛋白酶消化；所得多肽通过毛细管 7 97–2 50–55 HPLC-ICP-MS 进行分析，然后用电喷雾离子化(ESI-) MS/MS 分离柱的出口与ICP-MS 或 ESI-MS/MS 仪器连接。ICP-MS 进行表征，鉴定出富硒酵母中主要的含硒蛋白——甘油 操作条件见表2。 醛-3-磷酸酯脱氢酶-3 。由于胰蛋白酶裂解产物量非常少， 所以需要使用毛细管色谱。 表2. Agilent 7700x ICP-MS 操作条件