猪链球菌2型溶血素sly基因的表达及其产物的纯化和活性研究.pdfVIP

维普资讯 · 1198 · 生堡煎鱼 堂盘查 !生 旦箜垫鲞箜 塑 hinJEpidemio1，December2007，V。1．28，N。．12 — · 实 验 室 研 究 · 猪链球菌2型溶血素 基因的表达 及其产物的纯化和活性研究 刘丽娜 胡福泉 朱军民 赵岩 潘渠 李明 唐家琪 【摘要】 目的 克隆并表达猪链球菌2型(SS2)溶血素基因(5)，为筛选 SS2疫苗保护性抗原 奠定基础。方法 用PCR方法从 SS2临床分离株 05ZYH33的基因组DNA 中扩增出溶血素基因片 段，将 目的基因插入表达载体pET一30b(+)中，构建重组表达载体 pET30b—sOO重组载体经限制性 内 切酶酶切和 DNA测序鉴定后 ，转化大肠埃希菌(E．coliRosetta)。IPTG诱导表达 ，镍离子亲和层析 纯化重组蛋 白，鉴定 目的蛋 白的免疫学活性 以及溶血活性 。结果 PCR扩增的 5 基 因长度约为 1500bp，经测序分析，插入载体的sO基因序列准确并保持了正确的读框。经 IPTG诱导的 目的蛋 白 表达量约 占总蛋白的3O％，亲和层析纯化后 ，蛋 白纯度达 8O％以上。Westernblot检测证实该蛋 白能 与感染 SS2的人血清发生特异性结合 。溶血试验表 明重组蛋 白溶血素能使猪红细胞发生溶解 ，溶血 价为 256。结论 成功构建了表达载体 pET30b—sO，该载体可在大肠埃希菌中表达，表达蛋 白具有免 疫反应原性及溶血活性 。 关【键词】猪链球菌2型；sO基因；表达；活性研究 Studyon expression ofStreptococcussuis serotype2 sty gene，purificationand activityofitsproduct LJULi—na ，HU Fu—quan，ZHU Jun—min，ZHA0 Yan，PAN Qu，LJMing，TANG Jia—qi． DepartmentofMicrobiology，theThirdMilitaryMedicalUniversity，Chongqing400038，China Correspondingauthor：TAN GJia—qi．Email：tjq85@hotmail．corn 【Abstract】 Objective TocloneandexpressStreptococcussuisserotype2(S．suis2)slygenefor constructinganfoundationonidentificationofS．suis2protectiveantigen．Methods ThesO genewas amplifiedfrom S．suis2clinicalisolatestrain05ZYH33genomeDNA byPCR．Thegenerfagmentwas insertedintotheexpressionvectorpET一30b(+)tobuildpET30b—sly．WhenrecombinantvectorpET30b— sOwasidentifiedbyrestrictionenzymecuttingandDNAsequencingasaocrrectone，subsequentlyitWaS transofrmedto E．coliRosettaforexpression under IPTG induction．Theobtained fusion protein was purifiedby Ni—NTA affinity chromatography．Theimmunologicand hemolysisactivity ofthe purified proteinwasproved