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中国科学 C 辑 :生命科学 2008 年 第 38 卷 第 4 期 : 319 ~ 327 SCIENCE IN CHINA PRESS 用卫星DNA 沉默载体研究植物矿质营养相关的 基因: 以沉默番茄的高铁还原酶基因FRO1 为例 ①②† ①† ③ ④ ③* ④∗ 何秀霞 , 金崇伟 , 李桂新 , 尤广奕 , 周雪平 , 郑绍建 ① 浙江大学环境与资源学院, 污染环境修复与生态健康教育部重点实验室, 杭州 310029; ② 长春理工大学生命科学技术学院, 长春 130022; ③ 浙江大学农业与生物技术学院生物技术研究所, 杭州 310029; ④ 浙江大学生命科学学院, 植物生理与生化国家重点实验室, 杭州 310058 † 同等贡献 * 联系人, E-mail: zzhou@; sjzheng@ 收稿日期: 2007-09-19; 接受日期: 2008-01-15 国家自然科学基金(批准号:)和教育部科技创新工程重大项目培育资金(批准号: 705025)资助项目 摘要 病毒诱导的基因沉默(VIGS)是近年来发展的一种研究植物基因功能的新技 关键词 术. 至今尚不明确这种新技术是否能够有效地沉默植物根系中与矿质营养相关的基 病毒诱导的基因沉默 因. 本研究中, 以根系高铁还原酶基因FRO1 为例, 探讨了一种改进的卫星DNA 沉默 根系 载体(DNAmβ)在研究与根系矿质营养相关的基因功能中的适用性. 将番茄的铁还原 铁还原酶 酶基因FRO1 的cDNA 片段插入到DNAmβ载体中, 构建了FRO1 基因的沉默载体, 并 利用农杆菌介导法和辅助病毒中国番茄黄化曲叶病毒一起接种番茄. 结果表明, 缺 铁番茄根系的FRO1 mRNA 水平显著降低, 同时, 铁还原酶活性也明显降低. 上述结 果证明了VIGS 技术可以用来研究植物根系中与矿质营养相关的基因功能. 当植物受到矿质养分胁迫时, 体内会有大量的 逐个研究与养分吸收或同化相关的每个基因的功能 [3,4] 基因发生上调或下调表达. 例如给缺氮的番茄植株 并不可行 . 重新供给硝酸盐时, 根系中有 115 个基因会出现上调 病毒诱导的基因沉默(VIGS)是由携带目的基因 现象 [1]. 同样植物在缺磷、缺钾或者缺铁的条件下, 片段的病毒载体感染植物引起相应的寄主基因沉默 有 195 个基因的表达会出现很大变化 [2]. 可见植物体 的技术. 该技术无需遗传转化操作, 是一种通过抑制 内与矿质养分吸收和同化相关的功能结构及其调节 目的基因的表达来确定该基因的功能的快速方法[5,6]. 系统是相当复杂的. 我们迫切需要在如此大量的基 一般来说, 携带目的基因片段的病毒载体的整个构 因中找出响应矿质养分胁迫的关键基因. 目前比较 建过程只需要几天时间, 并且在病毒载体接种植物 常用的手段包括通过T-DNA法、转座子插入法或RNA 后, 相关基因沉默的表型也可以在 3~4 周内显现. 此 干涉(RNAi)技术来敲除或降低某个基因的表达来研 外, 在鉴定多基因家族的基因功能时, 通过上述 究该基因的功能. 但是由于这些技术都是基于突变 T-DNA插入法等技术进行研究, 只要基因家族成员 体植物的筛选, 既耗时又耗力, 因此要用这些技术来 中有一个未发生突变, 其他类似基因会通过补偿作