肺炎球菌表面蛋白A(PspA)的克隆表达及交叉免疫作用.pdfVIP

微生物学通报 JUN 20, 2009, 36(6): 936~942 Microbiology © 2009 by Institute of Microbiology, CAS tongbao@ 主编点评文章 肺炎球菌表面蛋白 A(PspA) 的克隆表达及 交叉免疫作用 1 1 1 1 1,2* 林子琳 林海英 汪媛媛 白锴凯 郭养浩 (1. 福州大学药物生物技术研究所 福建 福州 350002) (2. 福建省医疗仪器和医药技术重点实验室 福建 福州 350002) 摘 要: 本工作从中国临床最常见的 5 种荚膜血清型肺炎链球菌(FY01, FY05, FY6B, FY19F, FY23F)克隆获得编码PspA 蛋白N 端α-螺旋区的基因片段。分别将5 种PspA 基因片段克隆到表 达载体pET-27b(+)上, 成功构建重组质粒pET-pspA, 转化大肠杆菌 BL21(DE3) 。经乳糖诱导表达 和亲和层析分离, 获得高纯度重组蛋白。通过家族专属引物PCR 的方法鉴定这5 种荚膜血清型肺 炎球菌的PspA 蛋白所属家族, 并进一步根据基因测序结果通过生物信息学方法鉴定了所属支系。 FY01 rPspA 、FY6B rPspA 、FY19F rPspA 同属于家族Ⅰ支系 1, FY05 rPspA 属于家族Ⅰ支系 2, FY23F rPspA 属于家族Ⅱ支系3。以FY01 rPspA 免疫小鼠, 在20 μg/mL 免疫剂量时抗体滴度达到 1: 210000, 显示了重组蛋白较好的免疫原性。Western blotting 交叉免疫反应性研究表明, 抗FY01 rPspA 抗血清与FY01 rPspA 、FY6B rPspA 和FY19F rPspA 反应性较好, 而与另外两种重组蛋白几 乎无反应, 提示PspA 交叉免疫作用仅限于本支系内。动物保护实验表明, FY01 rPspA 免疫的小鼠 对 FY6B 、FY01 两种菌的攻击具有较好的保护作用, 对 FY05 、FY23F 的攻击未见明显的保护作 用。本研究成果对于研制高效肺炎球菌疫苗具有重要的指导意义。 关键词: 肺炎球菌表面蛋白A(PspA), 交叉保护作用, 家族, 支系, 克隆表达 Cloning and Expression of Pneumococcal Surface Protein A and Its Cross-immunoreactivity LIN Zi-Lin1 LIN Hai-Ying1 WANG Yuan-Yuan1 BAI Kai-Kai1 GUO Yang-Hao1,2* (1. Institute of Pharmaceutical Biotechnology and Engineering, College of Biological Science and Biotechnology, Fuzhou, Fujian 350002, China) (2. Fujian Key Laboratory of Medical Instrumentation and Pharmaceutical Techno