膨胀素联合复合酶处理对花粉破壁的影晌.pdfVIP

Vol. 24 No.1 第24 卷第1 期 深圳大学学报理工版 2007 年 1 月 JOURNAL OF SHENZHEN UNIVERSITY SCIENCE AND ENGINEERING Jan. 2007 文章编号: 1000-2618 (2007) 01-0106-05 膨胀素联合复合酶处理对花粉破壁的影晌 王娟，余少文，陈林烁 (深圳大学生命科学学院，深圳市微生物基因工程重点实验室，深圳518060) 摘 要:利用重组毕赤酵母菌株 Swollenin 的表达产物一一膨胀素，联合采胶酶和纤维素酶组成的复合 酶处理茶花粉，经镜检并计算其破壁率.结果表明，羊独采用复合酶或重组菌株发酵液对花粉进行破壁处 理，破壁率分别为 85.7% 和 89.2% ，两者联合处理使茶花粉外壁变软凹陷，萌发沟破裂，内容物呈团状释 放出来，花粉的破壁效果明显，破壁率高达 92.5%. 关键词:花粉破壁;膨胀素;复合酶;破壁率 中图分类号: Q241 文献标识码 :A 花粉(pollen) 是植物雄性配子体，含有多种 重组巴氏毕赤酵母菌株Pichia pastoris swollenin 维生素、酶、微量元素、生物活性物质等人体所必 ( P. pastoris-swo ) 由本实验室构建[8J 需的多种营养物质，被人们誉为微型营养库 [1J 1.2 主要试剂 6 花粉具有坚韧的细胞壁，分为花粉外壁与内壁，外 果胶酶(酶活二三1.2 X 10 U/g) 和纤维素酶 4 壁主要由于包粉素和纤维素组成，内壁主要由纤维素 (酶活注1.8 xl0 u/g) 购自和氏璧生物技术有限公 和果胶组成[2-3J 花粉壁的结构组成使之具有耐酸 司; BMGY 和 BMMY 酵母培养基，其组成成分参见 碱、耐高温高压，以及对胃酸和其他消化系统酶非 Invitrogen 公司的毕赤酵母表达系统操作手册;其余 常稳定，因此影响了花粉营养成分在人体内的吸收 化学试剂均为国产分析纯试剂. 利用，也阻止了提取时营养物质的释放.为提高花 1.3 重组Swollenin在毕赤酵母中的诱导表达 粉的利用价值，对花粉进行破壁十分必要. 目前的 将重组菌株接入BMGY 培养基 (25 mL 培养基 破壁方法多为化学法或机械方法破壁[4] ，存在设备 1250 mL) 中扩大培养(30OC , 250 r/min). 培养 昂贵、处理步骤繁琐等缺点.本文探索了一种更为 至 OD =2 -6. 离心，弃上清，用BMMY 培养基 600 温和的生物破壁方法. (50 mL 培养基1500 mL) 重悬沉淀， (30OC , 250 rl 膨胀素(expansin)是一类细