第15章 聚合酶链式反应.pptVIP

第十五章　聚合酶链式反应 聚合酶链反应 (Polymerase Chain Reaction ,PCR) 80年代中期发展起来的体外核酸扩增技术。 具有特异、敏感、产率高、 快速、 简便、重复性好、易自动化等突出优点；能在一个ephendof管内将所要研究的目的基因或某一DNA片段于数小时内扩增至十万乃至百万倍。 PCR的特点 PCR技术简史 2、PCR的实现 1985年美国PE-Cetus公司人类遗传研究室的Mullis 等发明了具有划时代意义的聚合酶链反应。其原理类似于DNA的体内复制，在试管中给DNA的体外合成提供一种合适的条件。 3、 PCR的改进与完善　 ① Mullis 最初使用大肠杆菌 DNA 聚合酶 I 的Klenow片段。缺点是：Klenow酶不耐高温， 90℃会变性失活，每次循环都要重新加；引物链延伸反应在37℃下进行，容易发生模板和引物之间的碱基错配，其PCR产物特异性较差，合成的DNA片段不均一。 ② 1988年初，Keohanog改用T4 DNA聚合酶进行PCR其扩增的DNA片段很均一，真实性也较高，但该酶不耐高温。 ③ 1988年Saiki 等从温泉中分离的一株水生嗜热杆菌(thermus aquaticus) 中提取到一种耐热DNA聚合酶