HK-Ⅱ基因的多态性分析及其与原发性肝癌的关系.pdfVIP

维普资讯 广 西 医 科 大 学 学 报 JOURNALOFGUANGXIMEDICALUNIVERSITY 2007D‘e。c，：24(6) SI HK-II基因的多态性分析及其与原发性肝癌的关系 黄勇奇 吴耀生 陈青云 陈 莉 贺菽嘉 (广西医科大学生物化学与分子生物学教研室 南宁 530021) 摘要 目的：探讨已糖激酶一Ⅱ(HK一Ⅱ)基 因的多态性位点和原发性肝癌 (PHc)易感性之间的关系。方法 ：应用 PCR—SSCP、 PCR-RFLP和PCR产物测序技术对 8O例原发性肝癌患者、122例健康对照者 的HK一Ⅱ基 因进行序列分析及测序 。结果：① HK-Ⅱ基 因启动子活性区在病例组和对照组中均没发现多态性位点；②HK-Ⅱ基 因第 4外显子 142位遗传密码存在 CAA— CAT多态性改变 ，在 PHC组和健康对照组之间差异有统计学意义 (PO．05)；③ 第 15外显子 736位遗传密码存在 CCC--~ CCG 的多态性改变 ，产生的SS基 因型在病例组和对照组的分布差异有统计学意义 (PO．05)；④联合分析发现 ，SS基 因型和 第 4外显子的多态性改变同时存在的情况在两组之间差异有统计学意义(PO．05)。结论 ：①HK Ⅱ基 因的启动子活性区碱 基组成稳定，不易发生突变 ；②CAA--+CAT和CCC-~CCG的多态性改变会增加 PHC的发病危险；③SS基 因型和 cAA—cAT 多态性改变同时存在时，会增加个体患肝癌的危险性 。 关键词 己糖激酶一Ⅱ；序列分析 ；多态性 ；原发性肝癌 中国图书资料分类法分类号 R735．7 恶性肿瘤具有旺盛的糖分解代谢 ，能够 比正常组织把更 1 材料与方法 多的葡萄糖代谢为乳酸[1。]。这一表型有赖于糖代谢关键酶 的高表达 。己糖激酶 (hexokinase，HK)是糖酵解途径 中的 1．1 标本来源及处理 ：选取经组织学证实的 8O例原发性肝 第一个限速酶 ，有 4种 同工酶，能在 ATP的参与下将葡萄糖 癌(PrimaryHepatoce11u1arCarcinoma，PHc)患者和 122名健 转化为 6一磷酸葡萄糖 。研究资料表 明r3]，生长迅速 的肿瘤 康成年人作为研究对象。8O例PHC患者 (病例组)新鲜血液 细胞 的已糖激酶一Ⅱ(HK一Ⅱ)活力明显比正常细胞高，使肿瘤 标本采 自广西医科大学第一附属医院的住院病人 。122例正 细胞能把大量 的葡萄糖转化成 6一磷酸葡萄糖 ，作为肿瘤细胞 常人(对照组)的血液标本采 自广西明阳糖厂职工，其肝功 在缺氧条件下特别有意义的碳源和能源 。本研究针对 HK一 能、血糖浓度 、血脂浓度均无异常 。对照组和病例组的每一 Ⅱ基 因启动子活性区(启动子区 3708～4000)、第 4外显子区 个体均采静脉血 2ml，以EDTA-Naz抗凝 ，统一按常规方法 (URF1243～ 1517)、第 15外显子 区 (URF4854～5281)的扩 用饱和酚抽提～无水乙醇沉淀法提取基因组 DNA。 增产物 以SSCP或 RFLP技术来检测其是否存在突变 ，并进 1．2 实验方法 行测序 ，旨在寻找可 以检测、评价与肝癌发生相关的HK-Ⅱ 1．2．1 HK一Ⅱ基 因特定 区域 的PCR扩增 ：见表 1。 基因的多态性位点与类型。 表 1 HK一Ⅱ基 因相关 区域 的扩增情况 1．2．2 对所选择区域扩增产物进行 SSCP分析或 RFLP分 析 。 1．2．2．1 启动子 区及第 4外显子 区域扩增产物 的 SSCP分 l广西医科大学第一 附属医院