KIR3DL1基因启动子亚克隆及表达调控载体的构建.pdfVIP

维普资讯 230 LabeledImmunoassays＆ ClinMed，Dee．2007，Vo1．14，No．4 KIR3DL1基因启动子亚克隆 及表达调控载体 的构建 高晓宁 ，于 力 ，林 季 (解放军总医院1．血液科 ；2．生化研究室，北京 100853) 摘要 ：为研究 KIR3DI1基 因的表达调控机制 ，亚克隆KIR3DL1基 因的核心启动子序列，并构建 KIR3DL1基 因 启动子一荧光素酶报告载体 ，采用 PCR法从含有 KIR3DL1基 因转录起始位点 5’侧翼区的质粒 中扩增 KIR3DL1 基 因核心启动子序列，产物纯化回收后与 pGEM—Teasy载体连接 ，测序鉴定正确 的重组子经限制性 内切酶 Bgl Ⅱ和 NcoI双酶切后 ，插入同样经 BglU和 NcoI双酶切的用于基因表达调控研究 的pGL3一Basic报告载体 ，最终 获得了长度为 254bp的KIR3DL1基因启动子克隆，构建 了调控荧光素酶报告基因的真核表达载体。通过酶切 及基因测序的方法证实所构建的重组子是正确 的，说明KIR3DL1基因启动子表达调控载体的构建是成功的。 关键词 ：KIR3DL1基因； 荧光素酶报告基因； 基因表达调控 中图分类号 ：R392．11 文献标识码 ：A 文章编号 ：1006—1703(2007)04—0230—04 Sub’cloningofKIR3DL1Promoter andConstructionoftheReporterPlasm id GA0Xiao—ning，YU I．i，LIN Ji (DepartmentofHematology，GeneralHospitalofPLA，Beijing100853，China) Abstract：Tostudythepossibleregulationmechanism ofKIR3DI1geneexpression，acorepro— rootersequenceofKIR3DI1genewassub—clonedandaKIR3DL1promoter-luciferasereporter vectorwasconstructed．A corepromoterfragmentoftheKIR3DI15-untranslatedregionwas amplifiedbyPCR．PCR productswerepurified andconnected withpGEM —T easyvector．Au— thenticatedbyDNA sequencing，theplasmidwasdigestedwithBg1Ⅱ／Nco工 andclonedinto BglⅡ／Nco工一digestedpGL3一basicreportervector．A 254bppromoterfragmentofKIR3DI1 genewasclonedinto thepGL3一Basicreportervector．Thereporterplasm id wasauthenticated byBglⅡ／Nco工 digestionandDNA sequencing．ItindicatedthattheKIR3DI1promoter— pGI3一Basicreportorvectorwassuccessfullyconstructed． Keywords：KIR3DI1gene； Luciferasereportervector； Regulationofgeneexpression 杀 伤 细 胞 免疫 球 蛋 白样 受体 (killercell 节 NK细胞活性 ，对异基 因造血干细胞移植 的预后 immnoglobulin—li