兔肝脱氧核糖核酸提取.pptVIP

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兔肝脱氧核糖核酸的提取 实验目的 掌握从动物组织中提取DNA的原理和方法。 基本原理 步骤: (一)脱氧核糖核蛋白的制备 10ml刻度离心管取8ml兔肝匀浆,3000转10分钟;(取试管标号,加试剂) 弃上清后,沉淀 + 0.15M氯化钠-0.10M乙二胺四乙酸钠8ml ,搅匀后3000转10分钟。弃上清所得即脱氧核糖核蛋白。(加DNA标准液和蒸馏水,二苯胺试剂,加二苯胺试剂的试管不能放在试管架上) (二)DNA粗制品的提取 沉淀 + 0.15M氯化钠-0.10M乙二胺四乙酸钠(终体积为4ml); 搅匀后 ,逐滴 + 0.5ml 15%SDS,搅拌3-5min ,溶液粘稠略带透明。(DNA与蛋白分离) + 1.0ml5M NaCl(终浓度1M),轻搅3-5min; + 等体积氯仿-异丙醇,加塞(塞紧防漏)振荡3-5min, 3000转10分钟; (实验二的试管放沸水浴) 吸管取上清于一10ml的刻度离心管中,+ 等体积氯仿-异丙醇,加塞(塞紧防漏)振荡3-5min,3500转15分钟;(取出实验二的试管室温放冷并595nm比色,注意添水到水浴锅中) 吸管取上清于一10ml的刻度离心管中,+ 两倍体积的95%的乙醇抽提; DNA析出,弃乙醇后则得到白色DNA粗制品。 *进行实验二的第二步 二苯胺显色法测定DNA含量 实验目的 熟悉751-型分光光度计的使用。 掌握DNA纯度测定的原理和方法 基本原理 DNA在的α-脱氧核糖在酸性条件下转变成ω-羟基-r酮基戊醛,与二苯胺共热后形成蓝色化合物,该化合物在595nm处最大吸收。 每ml含20-40ug范围内光密度与DNA的浓度成正比。反应液中加入少量乙醛,可提高反应的灵敏度。 步骤 一、 DNA标准曲线的制定 0号管调0,以A为纵坐标,DNA含量(ug /ml)为横坐标,绘制标准曲线。 二、样品含量测定 沸水浴10min,冷却后595nm比色,并从标准曲线上读数。 DNA纯度的测定 原理:核酸在220-320nm处呈特征性吸收,260nm处有最大吸收,测260/280可得知核酸的大致纯度。 260/280 =1.6 ~1.8 表示纯 1.8 含RNA 1.6 蛋白含量高 岛津UV-120 有两个光源:紫外和可见光 使用石英杯比色。 * * 二苯胺4ml 二苯胺4ml H2O 2ml 所提DNA 1ml + 1ml NaOH B U

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