大肠杆菌K88噬菌体的分离、分类初步鉴定和生物学特性的测定.pdfVIP

代保英：人肠杆菌K88噬菌体的分离、分类初步鉴定和生物学特性的测定 大肠杆菌K88噬菌体的分离、分类初步鉴定和 生物学特性的测定 专业：预防兽医学 研究生：代保英 导师：朱国强教授 摘 要 Escherichia coli，ETEC)引起的幼畜腹 由产肠毒素大肠杆菌(Enterotoxigenic 泻，在国内甚至在全球范围内给养猪业都造成了巨大的经济损失，在其病原菌中 EcoIi coli K88的流行性相对最广，并以EK88ac为优势血清型。目前，还没有一 coli 种长期有效的方法能够控制此病。E K88‘耐药性菌株正逐年增加，所以对于该 病的控制不能过分的依赖于抗生素。现在，越来越多的研究者支持利用裂解性噬 coli 菌体来预防和治疗E K88大肠杆菌病。 本试验以Ecoli K88为宿主菌，采用双层琼脂平板法从100份污水和粪便样 品中分离到3株裂解Ecoli 体增殖后的效价较高，均达到109pfu／ml以上。对3株噬菌体进行裂解谱的测定， coli 噬菌体BpB、BpC和BpD对16株E coli coli 除E 987P(5株)和叵coliF18(4株) K88外，噬菌体BpD还可以裂解E coliK88ab、 的某些菌株，裂解比例分别为2／5和2／4。通过3株噬菌体分别对E Ecoli coli coli K88ac和E K88ad的裂解曲线可以看到，噬菌体BpB、BpC对E coli 和BpC对EK88ab和Ecoli coil 升高然后下降，下降到一定程度后有再升高的趋势。噬菌体BpD可强裂解E K88ac和Ecoli coli 有再升高的趋势，BpD弱裂解EK88ab，其裂解曲线只有一个小幅度的上升和 下降，之后就大幅度上升，在测试时间的术期，其OD600值接近于对照组(对照组 扬州人学硕十学何论文 coli 为没有噬菌体BpD的EK88ab菌液)。 在3株噬菌体中，噬菌体BpB、BpD噬菌斑较大，边缘整齐而且透明，对其 进行大量增殖培养，噬菌体颗粒经lmol／L 纯化、磷钨酸染色后进行透射电镜观察，电镜下可以看到：噬菌体BpB由头部和 态上，噬菌体BpB属于C1形态群。噬菌体BpD有一长多面体对称的头部，直径 的尾，有肌鞘并且可发生收缩。从形态上，噬菌体BpD属于A2形念群，与T4噬 菌体非常相似。根据ICTV病毒分类第八次报告，噬菌体BpB属于有尾噬菌体目， 短尾噬菌体科，噬菌体BpD属于有尾噬菌体目，肌尾噬菌体科，T4．1ike噬菌体属。 设计引物，利用PCR技术扩增得到BpD aa)，与T4噬菌体相应部分 推导的氨基酸序列分别为gpl8(443aa)和gp23(281 属于pseudo