小麦种子淀粉酶酶学性质研究.docVIP

小麦种子淀粉酶酶学性质的研究 小麦种子淀粉酶酶学性质的研究 Enzymatic properties of amylases from wheat 摘要：在小麦种子中提取淀粉酶，研究相关酶学性质，了解温度、PH值以及激活剂和抑制剂对淀粉酶活性的影响，并且对酶的活力进行测定。不同的温度、PH条件下和加激活剂或抑制剂情况下淀粉酶将淀粉水解的程度不同，产物遇碘呈现不同的颜色，由此可知道酶活性的最适温度和最适PH，也可知道激活剂能使酶的性增加，抑制剂能使酶的活性降低。对酶的活力进行测定时，是测定产物麦芽糖的量，来表示酶的活力。麦芽糖能将3、5—二硝基水杨酸还原成棕红色的氨基化合物（520nm处有最大吸收峰），其颜色深浅与麦芽糖浓度成正比，利用分光光度法测定棕红色的氨基化合物吸光值，从而得到产物麦芽糖的量，来表示酶的活力[1]。 关键词：小麦种子；淀粉酶；温度；PH值；激活剂；抑制剂；酶的活力;分光光度计 研究背景：二十一世纪是生物信息时代，各种生物学领域研究层出不穷 ,对酶的研究是其中一个重要方面,目前对酶的研究已转入了后期，各种酶的生化性质也相继被研究出，酶是一种具有催化活性的蛋白质，由氨基酸通过肽链连接而成,只有在适当的温度、pH和离子强度下才具有生物活性,有些酶还需要辅酶或者辅因子[2]。通过此次实验研究，让我们进一步加深对淀粉酶的认识和学习，同时培养我们设计实验的基本思路，学会科学的实验组合，提出合理的实验方案,为以后研究其他种类的酶提供了研究方法和实验依据,也为我们以后更多的设计型实验作好铺垫。 目的：通过此次实验研究让我们进一步的加深对淀粉酶的学习和认识。同时，培养我们设计实验的基本思路，学会科学的实验组合，提出合理的实验方案，为研究其他种类的酶提供了研究方法和实验依据，也为设计性实验做好铺垫。 意义：生物体内的各种代谢变化都是由酶驱动的,酶有两种功能:其一,催化各种生化反应,是生物催化剂;其二,调节和控制代谢的速度、方向和途径,是新陈代谢的调节元件。酶对细胞代谢的调节主要有两种方式:一是通过激活或抑制以改变细胞内已有酶分子的催化活性;另一种是通过影响酶分子的合成和降解,以改变酶分子的含量。这种酶水平的调节机制是代谢的最关键的调节[4]。现代酶学正向着两个方向发展：酶的分子生物学和酶工程学，它们是现代生物技术的重要组成部分，应用范围包括医药，食品，化学工业，诊断分析和生物传感器，涉及的品种不少，如淀粉酶，其市场需求生产规模和产值均很乐观，并已产生巨大经济效益[5]。 1 材料与方法 1.1材料 小麦(Triticum aestivum)东北农业大学生命科学学院生化教研室提供 1.2方法 1.2.1标准曲线的制作 1.2.2粗酶的提取1.2.3定性法分析温度对酶活性影响 1.2.4定性法分析PH值对酶活性影响 1.2.5定性法分析激活剂或抑制剂对酶活性影响 1.2.6测定小麦种子不同部位α-淀粉酶的活力 0、A、B、C四个管，第一步在A、B、C三个管中加入上面Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ管中的酶反应液2 ml，在0号管中加入蒸馏水2ml；第二步在0、A、B、C四个管中加入3、5—二硝基水杨酸（DNS）2ml；第三步将各管混匀，放在沸水浴中5min，冷却，加蒸馏水定容至25ml；最后以0号管为空白对照，测定A、B、C三个管中溶液的吸光值（OD540），再查标准曲线，得到对应吸光值下的麦芽糖的量[1]。 2 结果 2.1温度对小麦淀粉酶的影响 室温：酶的活性受到一定的抑制，淀粉被部分水解，加入碘液后呈浅蓝色； 40℃：酶的活性达到相对最大，淀粉完全被水解，加入碘液后接近无色； 沸水浴：酶完全失活，淀粉未被水解，加入碘液后呈蓝色； 由此可以看出40℃是小麦淀粉酶的最适温度。 2.2PH对小麦淀粉酶的影响 PH=3.0：淀粉酶完全失活，淀粉未被水解，加入碘液后呈深蓝色 PH=5.6：淀粉酶活性达到相对最大，淀粉被完全水解，加入碘液后呈无色 PH=9.6：酶活性受抑制，淀粉被少量水解，加入碘液后呈浅蓝色 由此可以看出pH=5.6是小麦淀粉酶的最适PH 2.3激活剂，抑制剂对小麦淀粉酶的影响 空白对照组：加入碘液后几乎呈无色 加NaCl的溶液：淀粉酶活性增加，使淀粉完全水解，加入碘液后呈无色 加CuSO4的溶液：淀粉酶活性降低，淀粉被部分水解，加入碘液后呈深蓝色 由此可以看出NaCl是小麦淀粉酶的激活剂；CuSO4小麦淀粉酶的抑制剂 2.4小麦种子不同部位α-淀粉酶含量 (1)小麦种子的芽：OD(0)= 0 OD(A)= OD(B)= OD(C)= 根据公式：α-淀粉酶活性=（A-A’）×样品稀释总体积 样品重 得小麦种子芽的α-淀粉酶活性