高效液相色谱法测定仙鹤草中芹菜素的含量.docVIP

高效液相色谱法测定仙鹤草中芹菜素的含量 赵昱玮 摘要：目的 建立仙鹤草中芹菜素的含量测定方法。方法 采用高效液相色谱法测其含量，色谱柱为Diamonsil（钻石）液相色谱柱（4.6*250mm，5μm），甲醇-0.2%磷酸溶液（98:2）为流动相，检测波长为210nm，流速为1.0ml/min。结果 芹菜素在0.22-8.8μg范围内线性关系良好，r=1.0000；平均回收率为96.5%，RSD=1.15%。结论 本方法简便准确，重复性好，可作为仙鹤草药材质量控制的有效方法。 关键词 ；高效液相色谱法；仙鹤草；芹菜素；含量测定 仙鹤草为蔷薇科龙芽草属植物龙芽草A grimonia pilosa Ledeb.的干燥地上部分，又名脱力草、龙牙草。始载于1062年苏颂的《图经本草》，为我国传统中药。仙鹤草性平，味苦涩，归心、肝经，具有收敛止血、截疟、止痢、解毒的功效，临床上用于各种出血症，如咯血、吐血、崩漏下血、疟疾、血痢、脱力劳伤、痈肿疮毒、阴痒带下[1]。现代医药学研究证明，仙鹤草中含有酚、酯、黄酮、鞣质、糖苷、有机酸、挥发油、三萜皂苷等极其复杂的化学成分，并具有抗肿瘤、降血糖、镇痛抗炎、止血、抗疟、抗心律失常等多方面的药理作用[2]。 沈阳药学院等药物研究机构的研究者们[3]从仙鹤草根芽中分别得到脂肪族化合物正廿九烷和甾体类化合物β-谷甾醇。药理实验表明，β-谷甾醇具有明显的降胆固醇、止咳、抗癌、抗炎等药理作用[4]。目前没有报道对仙鹤草中所含β-谷甾醇进行薄层鉴别和含量测定。本试验对仙鹤草中β-谷甾醇进行薄层鉴别和含量测定。在选定的色谱条件下，供试溶液中β-谷甾醇与相邻组分分离度良好。经方法学考察，方法的重复性、稳定性、精密度、加样回收率均符合有关规定，可用于该药材的质量控制。 1 仪器与试药 Aglient 1100（VWD）高效液相色谱仪：AglientG 四元泵(Quatpump)，AglientG1322A真空在线脱气机(Degrasser)，Aglient G1313A自动进样器(ALS)，Aglient chimstation system(安捷伦化学工作站)；电子天平(德国赛多利斯，BP-211D 型)；超声波清洗器(KQ3200DB型，昆山市超声仪器有限公司)。三氯甲烷(天津市申泰化学试剂有限公司)；无水乙醇(北京化工厂)；甲醇(色谱纯,天津科密欧公司)；磷酸(北京红星化工厂)。β-谷甾醇对照品(中国药品生物制品检定所，批号11085-200504)；仙鹤草(市面药店购买,经吉林省中医药科学院南敏伦老师鉴定为蔷薇科龙芽草属植物龙芽草)。 2 方法与结果 2.1　薄层鉴别 2.2含量测定 2.2.1 色谱条件 色谱柱：Diamonsil（钻石）C18液相色谱柱（4.6*250mm，5μm）；检测波长210 nm；流动相：甲醇-0.2%磷酸(98:2)；流速：1.0 mL/min。理论塔板数均大于3000。色谱图见图1。 2.2.2 对照品溶液的制备 精密称取β-谷甾醇对照品4.4mg，置10mL容量瓶中，加无水乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液。 2.2.3 供试品溶液的制备 取仙鹤草约5g，精密称定，置于锥形瓶中，加三氯甲烷100 mL，浸泡1h，超声处理(功率150 W，频率40 Hz)1h，滤过，蒸干，残渣加无水乙醇使溶解并转移置25mL量瓶中，加无水乙醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，即得供试品溶液。 2.2.4 线性关系考察 分别精密吸取0.5、1、2、5、10、20μL 的对照品溶液，注入液相色谱仪中，按上述色谱条件测定色谱峰面积。以峰面积为纵坐标，对照品质量为横坐标，绘制标准曲线，回归方程为：Y＝29.621X＋2.180 7，r＝1.0000。结果显示，进样量在0.22～8.8μg范围内线性关系良好。 2.2.5 精密度试验 取对照品溶液10μL，在上述色谱条件下重复进样5次，分别测得β-谷甾醇峰面积，结果β-谷甾醇峰面积RSD＝1.03%,表明仪器精密度良好。 2.2.6 稳定性试验 取同一份样品供试液，分别于配置后0、2、5、9、12 h进样测定，测得β-谷甾醇含量的RSD＝1.80%，表明供试品溶液在12 h内稳定。 2.7 重复性试验 取同一批样品粉末约5 g，共5份，精密称定，分别按“2.2.3”项下方法制备供试品溶液，各取20μL分别进样测定，结果β-谷甾醇含量平均值为0.073%，RSD=0.91%。 2.2.8 加样回收率试验 取样品5份，每份取粉末约2.5 g，精密称定，准确加入β-谷甾醇对照品一定量，按“2.2.3”项下方法制备，测定含量，计算回收率,结果见表1。 2.