蛋白酶固定化及在生物活性物质开发中应用研究进展.pdfVIP

466 2008, Vol. 29, No. 02 食品科学 ※专题论述 蛋白酶的固定化及其在生物活性物质 开发中应用的研究进展 杨利花，陈庆森* (天津市食品生物技术重点实验室，天津商业大学生物技术与食品科学学院，天津 300134) 摘 要：从动植物蛋白中通过酶学方法释放具生物活性的肽类物质是目前酶工程研究的热点课题。固定化酶技术 是酶工程的核心技术之一，在生物科学研究、生物产品的制造、食品科学、化学化工及环境科学领域得到了广泛 应用。开发新型载体材料，设计简单、方便、高效、条件温和的固定化方法，是固定化酶技术研究的重点。本 文结合自己的工作，重点介绍了壳聚糖材料、纳米材料在固定化酶制备中的应用，定向固定化方法研究进展，蛋 白酶的固定化及其在生物活性物质开发方面的一些研究进展。 关键词：蛋白酶；壳聚糖；纳米材料；定向固定；生物活性物质 YANG Li-hua，CHEN Qing-sen* Abstract： Key words：protease；chitosan；nanostructures；oriented immobilization；bioactive components 中图分类号：Q814.2 文献标识码：A 文章编号： 从20世纪下半叶开始许多学者致力于固定化酶在各 外的文献表明仅有少量的固定化酶应用于实际生产，目 个领域的应用研究。与游离酶相比固定化酶在保持其高 前选择合适的载体和简单易行的固定化方法并使其规模 效、专一及温和的酶催化反应特性的同时又克服了游离 化仍是固定化酶急需解决的问题。 酶的不足之处，呈现储存稳定性高、分离回收容易、 固定化酶履行两种功能：非催化功能，用于帮助 可多次重复使用、操作连续可控、工艺简便等优点。 分离(如从应用微环境中分离催化剂，重复使用催化 固定化酶的研究在化学、生物学、生物工程医学及生 剂，特别用于控制加工过程)；催化功能，在特定的时 命科学等领域异常活跃，其主要应于以下四个方面：第 间和空间内转化目标产物。固定化酶的主要任务就是选 一，用于分析和医学应用方面；第二，用于提纯蛋白 择合适的载体(即固定化酶的非催化部分，催化部分构 质和酶；第三，固相蛋白质化学研究的基本手段；第 建的位置)、操作条件(pH值、温度和介质的性质)和酶 四，控制蛋白质药物的释放。然而，检索大量的国内 (来源、性质和纯度)来设计固定化催化剂。固定化方法 收稿日期：2007-11-28 基金项目：国家科技攻关计划重大专题项目(2006BAD04A08) 作者简介：杨利花(1981-)，女，硕士研究生，研究方向为发酵生物技术、生物活性物质。 ：yanglihuahenan@E-mail *通讯作者：陈庆森(1957-)，男，教授，研究方向为发酵生物技术。E-mail：chqsen@ ※专题论述 食品科学 2008, Vol. 29, No. 02 46 7 的选择既要满足催化功能的需要(特别在产量、效率、 研究。探索了载体制备方法，具体方法为：壳聚糖2.5g 稳定性和可选择性方面的需要)也要满足非催化功能的需 于99ml去离子水中磁力搅拌10min，加1ml乙酸，室温 要(如分离、控制加工过程、下游处理的需要)，只有 搅拌3h，4℃过夜。将壳聚糖溶液逐滴滴入凝结液，凝 催化功能和非催化功能都满足特殊应用的需要时该固定 结3h，壳聚糖将凝聚成白色颗粒，用去离子水充分洗 化酶才可以称为 “高效”的。高效的固定化酶可以监 涤至中性备用。分别研究了4% NaOH溶液和乙酸乙酯 控反应过程