可口革囊星虫cDNA文库的构建及蚯蚓血红蛋白基因序列的分析.pdfVIP

第29卷 第 1期 台 湾 海 峡 Vo1．29， No．1 2010年2月 JOURNALOFOCEANOGRAPHY IN TAIWAN STRAIT Feb．，2010 可 口革囊星虫 cDNA文库的构建及蚯蚓血红蛋 白 基因序列的分析 王孟前 ，李 晔 ，苏秀榕 ，李太武 ，贺静静 ，王中华 ，周 君 (1．宁波大学生命科学与生物工程学院，浙江 宁波 315211；2．宁波城市职业技术学院，浙江 宁波 31511o) 摘要：提取可 口革囊星虫血总 RNA，反转录成 eDNA，将大于 500bp的eDNA片段连接入载体 pBluescriptIISK (+)，电转化至DH10B宿主菌中，得到原始文库．对 eDNA文库的滴度、重组率和 插入片段的大小进行检测，并挑取500个单菌落进行测序．结果表明，eDNA文库的库容量为3．o6 X10cfu，重组率达97．2％．经测序共得到437条序列，分析得到211个单基因簇 (unigene)，其中 115条序列有相关同源性．测序得到蚯蚓血红蛋 白eDNA全长序列为823bp，ORF编码 120个氨基 酸，蛋白分子量为 13．63kD，等 电点为5．78．NCBI上 同源性 比对结果则表明，与 Siphonosoma cMmn e的蚯蚓血红蛋白同源性最高为67％．可口革囊星虫eDNA文库的构建为今后克隆和研究 可 口革囊星虫的相关功能基因奠定了坚实的基础． 关键词：海洋生物学；可口革囊星虫；cDNA文库；序列分析；蚯蚓血红蛋 白 DOI：10．3969／J．ISSN．1000—8160．2010．01．004 中图分类号：Q178．53 文献标识码：A 文章编号：1000．8160(2010)01．0020．07 可 口革囊星虫(Phascolosomaeseulenta)属星虫动物门(Sipuncula)，革囊星虫纲(Phascolosomatidea)，革囊 星虫 目(Phaseolosomatiformes)，革囊星虫科 (Phascolosomatidae)，革囊星虫属 (Phascolosoma)动物．民间又称 其为海蛆、沙虫、海丁、土笋等．其体长最长可达 10cm，为我国的特有种，广泛分布于浙江、福建、广东、广西、 海南和台湾等省区¨．它肉质脆嫩、味道鲜美，含有丰富的营养物质，有 “海洋冬虫夏草”之称，我国沿海居民 常食用 J．可El革囊星虫含有多种活性物质，能够调节机体多种机能，含有丰富的蛋 白质、多种氨基酸、微 量元素等，具有多种药理活性 -s]．由于寒武纪大爆发时期没有星虫的化石记录，其体内的一些活性物质就 显得尤为重要，蚯蚓血红蛋 白(hemerythrin)就是其中的1种．蚯蚓血红蛋 白是 1种含铁的金属蛋 白，是天然 的非血红素载氧体．它存在于多毛类 (Polychaeta)、曳腮类 (Priapulida)、星虫类 (Sipunculia)和腕足类 (Braehiopda)等为数不多的无脊椎动物体内，并在这些动物体内担负着运送和贮存氧的重任 一】． 目前，国内外对可口革囊星虫还没有开展功能基因组学研究，没有构建可 口革囊星虫文库的相关报道． 国内外对可 口革囊星虫的研究主要集中在分类、养殖、组织学、生理生态、繁殖和生物活性等方面 】．目前登 录到GenBank中的可 口革囊星虫的基因数为7条，相应的蛋白质序列数据为6条，且大多是部分序列，全长 基因很少．本研究工作构建了可口革囊星虫的eDNA文库，并对测序的结果进行了分析，为今后对其功能基 因组的深人研究奠定了基础． 1 材料和方法 1．1 材料 研究用的可 口革囊星虫于2008年2月取 自浙江省宁波奉化市开苗海淡水养殖场．RNA提取试剂盒、 eDNA文库构建所需试剂、载体pBlueseriptIISK(+)、宿主菌DH10B和DNA分子量Marker均为TaKaRa产 品．电脉冲仪为BIORAD公司产品． 收稿日期：2009—03-13 基金项 目：国家 自然科学基金资助项 目；浙江省重大科技攻关项 目(2006C13089) 作者简介：王孟前(1985～)，女，硕士研究生；E—mail：qie