犬源环孢子虫的形态学与分子鉴定.pdfVIP

124 中 国 人 兽 共 患 病 学 报 ChineseJournalofZoonoses 2010，26 (2) 文章编号：1002—2694(2O10)02—0124—04 犬源环孢子虫的形态学与分子鉴定* 岳彩玲，李国清，颜 超，程家林，高振永，y-4 霞 摘 要：目的 对犬粪中的疑似环孢子虫卵囊进行形态学和分子鉴定。方法 对首次在犬粪 中发现 的疑似环孢子虫卵 囊的形状、大小、抗酸染色、孢子化和 自发荧光等形态特征进行 了观察。根据 GenBank已发表的环孢子虫序列设计并合成 3 条 引物，对犬源环孢子虫 18SrDNA 部分序列进行巢氏PCR扩增，将扩增产物纯化并克隆至载体pMD19-T，挑选阳性克隆测 序并进行 同源性及系统进化分析。结果 该疑似环孢子虫卵囊与人的环孢子虫卵囊形态特征相似，扩增的18SrDNA片段大 小为 715bp，与预期 目的片段一致。序列同源性和系统发 育分析显示该犬源环孢 子虫与环 孢子虫 间的相似 性最高，系统进化 树 中处于同一分支。结论 首次从犬粪中发现的疑似环孢子虫卵囊可以确定为环孢子虫。 关键词 ：犬；环孢子虫 ；形态特征；18SrDNA；巢氏PCR 中图分类号 ：R382．3 文献标识码 ：A MorphologicalandmolecularidentificationofCyclospora—likeorganism from dogs YUECai—ling，LIGuo—qing，YAN Chao，CHENGJia—lin，GAO Zhen—yong，LIU Xia (CollegeofVeterinaryMedicine，SouthChinaAgriculturalUniversity，Guangzhou510642China) ABSTRACT：Themorphologicaland molecularidentificationsofCyclospora—likeoocystsofdogswereunderwentin the presentstudy，inwhichthemorphologicalcharacteristicsoftheCyclospora—likeoocystsfirstlyfoundinthestoolsamplesof dogs，suchasshape，size，acid—faststaining，sporulationandauto—fluorescene，wereobserved．Accordingtothepublishedse— queneeoftherDNA geneofCyclosporainGenBank，3primersweredesignedandwereusedtoamplifypartofthe18SrDNA geneofdog—associatedCyclospora—likeorganism bynestedPCR．TheampliconswerepurifiedandclonedintovectorpMDI9T． Then，thepositiveclonesscreenedweresequencedandsubjectedtosequencehomologyandphylogeneticanalysis．Itwasfound thatthemorphologicalcharactertisticsoftheCyclospora—likeoocystsindogsweresimilartothatofthehumanCyclospoaoo— cystsandthesizeoftheamplifiedfragmentof18SrDNA wasprovedtobe715bp，thatwasidenticaltothatofthetargetfrag— ment．Basedontheresultsofsequencehomologyandphylogenetieanalysis，thedog—associatedCyclospora—likeorganism wasi— dentifiedastheCyclosporaspecies． KEY W ORDS：Cyclospora sp；morphologicchara