急性白血病细胞中ID4基因甲基化的PCR定量检测系统的建立及其特异性和敏感性.pdfVIP

中国实验血液学杂志 -269- 如H川Ⅱf矿E印e，咖P仃幻，^k，MfDfD∥2014；22(2)：269～274 文章编号(Anicle ID)：1009—2137(2014)02—0269—06 -论著· 急性白血病细胞中删基因甲基化的PCR定量检测 系统的建立及其特异性和敏感性 刘洋1，康慧媛2，王莉莉3，卢学春‘，朱宏丽h，于力3+ 解放军总医院老年血液科，2临检科，3血液科，100853北京 摘要 删基因启动子区甲基化发生率在急性白血病中极高，甲基化程度与急性白血病关系密切。因缺少合适 的研究方法，其具体的甲基化量化水平与疾病的关系，人们一直缺乏认识。本研究旨在建立删甲基化定量PcR 体系，同时验证该方法的特异性及敏感性，并初步尝试在初治急性白血病骨髓样本中评估肼的甲基化水平。首 先构建质粒并建立体系标准曲线，分别使用MSP和定量MsP对细胞系样本进行检测，以传统MsP的结果为对照， 验证新方法的特异性；按不同比例将甲基化阴性和阳性细胞混合，用甲基化定量PCR扩增验证新方法敏感性。结 果表明，本研究成功建立了符合绝对定量要求的标准曲线；通过细胞系验证，MsP结果与定量MsP结果完全一致； 同时在甲基化阴性细胞背景下，定量MSP可以稳定的检测到l：10。水平的脚甲基化阳性细胞。在急性白血病 骨髓样本检测中，定量MsP甲基化阳性检出率高于MsP。结论：本研究成功建立了完整的删基因甲基化定量 PCR体系，该方法特异性好、敏感性高。 关键词国4基因；DNA甲基化；甲基化定量PcR；急性白血病 A issn．1009—2137．2叭4．02．002 中图分类号R733．71；R 文献标识码 doi：10．7534n EstablishIIlentof PCR for Metllyladon．SpecificQ!llanata廿veSystem in ⅡⅪGeneAcuteI烈lkeHliaCdlsandIts Specifici钾andSeI戚廿vi钾 L∥ UU％懈1，碰ⅣG胁肛地口，z2，V盼ⅣG“．L，，LU豇圯一C^“，11．ZHU日Dn譬一Lf”，yU j C撕cat PLAGenemt Depa帆ent西GemtricHemnt0Iogy，zLnbornloq，3D印nn舢nf对H删nfotogy，ChtneseHosp蹦，Be日ing l00853．C协加口 ‘Co_correspo托dingAHthors：YU“．Senlor cn@smⅡ．cD，，l Z日U砌H譬一Lf，S已n面r|P^ⅪfcfⅡn，7krDrDr^亿5船rPos增，Ⅱd“n把．E．卅nff：厶fz，12202 AbstractDNA was memylationof皿WgenepmmoteroccurredfreauentlvinDatientswimacuteleukeIlliaaIld found tobe relatedto山etumor tolackofthe