食管黏膜上皮细胞与SIS复合培养及生物学特性的研究.pdfVIP

742 Chinese Journal of Reparative and Reconstructive Surgery, June 2008, Vol. 22, No.6 · · 食管黏膜上皮细胞与SIS 复合培养及生物学特性研究 谭波 魏人前 杨志明 李秀群 韩平 智伟 解慧琪 【摘 要】 目的 探讨体外快速培养犬食管黏膜上皮细胞（esophageal mucosa epithelial cells，EMECs ）及其与 SIS 体外复合培养的方法，为组织工程食管研究提供实验依据。 方法 取2 ～5 周龄幼犬5 只，无菌获取其食管组织，采 用混合酶消化法，分离培养EMECs ，于倒置相差显微镜下观察细胞生长情况，取第2 代细胞培养 1 ～5 d 绘制生长曲线并 进行细胞表面标志物细胞角蛋白 19 （cytokeratin 19，CK-19 ）检测。取第2 代EMECs 与SIS 复合培养4 、8 d，行形态学、 组织学及扫描电镜观察。 结果 倒置相差显微镜下EMSCs 呈典型铺路石样。CK-19 免疫组织化学染色可见细胞胞浆 呈阳性染色。MTT 法测定第2 代细胞在传代培养2 d 生长达高峰。EMECs 与SIS 复合培养4 d ，细胞呈多角形，细胞间 连接紧密，呈铺路石样排列；SIS 表面形成1 ～2 层细胞组成的复层上皮样结构。8 d 时，细胞密度增大，SIS 表面形成2 ～3 层细胞组成的复层上皮样结构；扫描电镜见细胞在材料上已大量增长，呈层状排列。 结论 采用混合酶消化法，用含6% FBS 的DKSFM 培养犬EMECs ，方法简便，适合推广应用。SIS 与EMECs 有良好的相容性，可作为构建组织工程食管的 理想支架材料。 【关键词】 食管黏膜上皮细胞 SIS 复合培养 生物学特性 犬 中图分类号：R318.1 Q813.1 文献标志码：A AN EXPERIMENTAL STUDY OF COCULTURE OF ESOPHAGEAL MUCOSA EPITHELIAL CELLS WITH SIS AND THEIR BIOLOGICAL CHARACTERISTICS/ TAN Bo, WEI Renqian, YANG Zhiming, LI Xiuqun, HAN Ping, ZHI Wei, XIE Huiqi. Division of Stem Cell and Tissue Engineering, State Key Laboratory of Biotherapy, West China Hospital, Sichuan University, Chengdu Sichuan, 610041, P.R.China. Corresponding author: XIE Huiqi, E-mail:xiehuiqi@163.com 【Abstract 】    Objective To explore an effective method to cultivate esophageal mucosa epithel ial cells (EMECs) of canine in vitro, and to observe the biological characteristics of EMECs growing on SIS in order to provide an experimental basis for esophagus tissue engineering. Methods Esophageal tissues were obtained from five healthy dogs aged 2 to 5 weeks under sterile conditions. The primary EMECs were cultivated with defined keratinocyte serum free medium (DKSFM) containing 6% FBS. The morphologica