青蒿琥酯对T细胞淋巴瘤细胞株凋亡诱导作用的实验研究.pdfVIP

V01．20No．6 ·603· 中国中医药科技2013年11月第20卷第6期Nov．2013 青蒿琥酯对T细胞淋巴瘤细胞株 凋亡诱导作用的实验研究 陈均法△ 张卓一姚斌莲郑智茵庄海峰刘永林沈一平沈建平 (浙江中医药大学附属第一医院·杭州3100106) 摘要 目的：探讨青蒿琥酯对T细胞淋巴瘤细胞株Jurkat细胞的凋亡诱导作用及其可能的作用机制。 方法：采用M-I-I．比色法检测青蒿琥酯对Jud泓细胞体外生长的抑制作用；细胞形态学、DNA琼脂糖凝胶 一2、B缸、c鹊p船e一8和IcAD蛋白表述水平的变化。结果：青蒿琥酯对Jurkat细胞的生长有明显的抑制 作用。且生长抑制率与药物作用浓度呈正相关(P0．01)，呈浓度依赖性；其增殖抑制作用与诱导细胞凋 亡有关；随药物浓度的增高Bd一2和ICAD蛋白表达量逐渐下降，而B娃蛋白表达上调，C鹊pa的一8蛋白 出现明显的剪切激活带。结论：青蒿琥酯具有诱导Jurkat细胞凋亡作用，既能通过线粒体途径又能通过 外源性途径诱导JuIkat细胞凋亡。 主题词 青蒿琥酯／药理学T细胞淋巴瘤细肜药物作用 细胞凋亡体外研究 青蒿琥酯是具有倍半萜内酯类抗疟药青蒿素的衍生物， 测细胞增殖抑制率，半数抑制浓度(IC∞)用Wt法计算。 除具有高效抗疟作用外，还具有免疫调节、抗寄生虫、抗病 实验重复3次，设复孔3个，取平均值为最终结果。 毒、抗肿瘤、保肝、抗炎、松弛平滑肌等作用…。青蒿琥酯对 1．3．2Jurkat细胞形态观察取不同时相细胞涂片，瑞特 于T细胞淋巴瘤的抑制作用以及作用机制如何，文献鲜见报 染色，观察细胞形态变化。 道。本研究观察了青蒿琥酯对T细胞淋巴瘤细胞株的凋亡 1．3．3Jurl咀t细胞DNA片段化检测取对数生长期细胞， 诱导作用并探讨其可能的作用机制，为其进一步应用于淋巴 瘤的临床治疗提供理论依据。 同培养48小时，收集各组细胞，用PBS洗2次，裂解细胞，提 1材料和方法 取细胞DNA，将其溶于20一TE缓冲液中，取5一加入含EB 1．1药品和主要试剂 的1％的琼脂糖凝胶，于50V恒压下电泳约l小时，凝胶自 注射用青蒿琥酯：桂林南药股份有限公司产品，5％碳 动成像系统拍照。 酸氢钠1ⅡIl溶解后，用砒MI1640配制所需浓度。四甲基1．3．4Jurkat细胞凋亡率检测流式细胞仪检测。 偶氮唑蓝(M1．r)及PI试剂盒：购自Si秘公司；细胞凋亡1．3．5 DNA LADDER提取试剂盒：北京博大泰克生物基因技术有 8剪切激活的测定w∞tem—blot分析。总蛋白提取后， 限公司；Bd一2、B娃、C脑p衄e一8、辣根过氧化物酶连接的抗 Bmfo耐法测蛋白质浓度，取10峭蛋白样品与2×加样缓冲 鼠IgG、辣根过氧化物酶连接的抗兔IgG：均购自美国cell 液等体积混合，煮沸变性5分钟后上样于100、120、1509／L Cn堰公司 Sigrlal公司；a硝n和ICAD单克隆抗体：美国S帅ta 产品。 时，立即加入一抗溶液，平缓摇动，4℃过夜。室温下加二抗 1．2细胞和细胞培养T细胞淋巴瘤细胞株Ju妇：由浙江 溶液孵育1小时。以B—actin作为内参照，显影参照ECL 大学医学院附属第一医院血液病研究所提供。细胞悬浮生 试剂盒说明书操作。 长于RPMll640培养液中，培养于37℃、体积分数为5％c0：