产志贺样毒素大肠埃希菌1类整合子鉴定和分析.pdfVIP

产志贺样毒素大肠埃希菌1类整合子的鉴定和分析1 李咏梅，李凡 吉林大学基础医学院病原生物学教研室 长春，130021 Email：mayflower380@163.com 摘 要: 本文通过常规分离出大肠埃希菌、血清学分型，PCR 法鉴定产 stx1-2 毒素性菌株； 纸片扩散法对 17 种抗生素进行耐药性监测和分析；PCR 法鉴定 1 类整合子阳性株；PCR 产物 测序并对结果进行分析，以了解 1 类整合子在产志贺样毒素大肠埃希菌中的分布，阐明整合 子中耐药基因盒的种类及相互关系。结果表明各种标本中共鉴定出 46 株产志贺样毒素大肠 埃希菌，其中 23 株为 O157：H7; 全部 STEC 对复方新诺明耐药，对链霉素耐药率为 28.3%， 氨苄西林为 30.4%，而且有 5 株对至少 4 种以上抗生素多重耐药，耐药谱为复方新诺明-链 霉素-氨苄西林。46 分离株中有 11株(23.9%)鉴定出 1 类整合子, PCR 产物测序得知 9 株携 带 aadA1 基因盒, 2 株携带 aadA2 基因盒，传递对氨基糖苷类抗生素的耐药性。 结果证实 产志贺样毒素大肠埃希菌存在 1 类整合子及其相关的基因盒，而且与氨基糖苷类抗生素的耐 药性可能有关。 关键词：志贺样毒素；大肠埃希菌；整合子 1．引 言 细菌耐药性的迅速蔓延及扩散，给临床感染性疾病的治疗带来了巨大的副作用。已经证 实的两种参与耐药基因扩散的机制，即耐药性质粒及转座子在其中起着重要的作用[1]。近年 来，第三种耐药基因的扩散机制已被发现，即整合子（integron），一种通过特异重组位点 介导耐药基因整合的DNA元件。这种重组系统依赖两个决定子，一是编码特异位点DNA整合酶 （integrase）的int基因[2]；二是被整合酶识别，并作为插入基因接受者的相邻位点，即 attI(integron attach)位点。而插入的基因包含着被叫做基因盒(gene cassette)的可移动 元件，大多数都表达耐药性。迄今为止，根据int基因的不同，已有4 类整合子得到了鉴定， 大多数临床分离株及革兰阴性杆菌中存在着 1类整合子[3]。其由两个保守片段组成，5’-CS 包含int基因，attI位点和共同的启动子Pant，而 3’-CS包含一个耐杀菌剂的基因 （ qacE△ 1），一个磺胺基因（sul1）和一个未知功能的开放读码框 （orf5）。中央可变区域包含不同 的基因盒组合，至少 70 种不同的耐药基因盒已被发现，它们在种内及种间转移，使宿主菌 成为广谱耐药性细菌[4]。 产志贺样毒素大肠埃希菌（Shiga toxin-producing E.coli，STEC）是引起大规模食源 性食物中毒的主要病原菌[5]。STEC中有 100 余个血清型的致病性大肠杆菌可以致病，主要血 清型是O157：H7，可引起非出血性腹泻，出血性结肠炎（haemorrhagic colitis, HC），溶 1本课题为高等学校博士学科点专项科研基金资助课题，编号为 -1- 血性尿毒综合症(haemolytic uraemic syndrome, HUS)。尽管STEC所引起的腹泻多数是自限 性的，但是早期应用抗生素进行治疗，可以减少发展成HUS的病例，不良后果则是EHEC多药 耐药菌株的增加[6]。国外已有资料表明，耐药整合子在临床分离株中比较常见，而在我国未 见对此方面的报道，本研究主要阐明各种来源的产志贺样毒素大肠埃希菌中耐药整合子的分 布、特征、所含基因盒的状况以及所表达的耐药信息。 2．材料和方法 2．1 菌株 经常规分离，PCR 鉴定毒力基因，从环境、动物粪便及临床标本中分离鉴定出 46 株产 志贺样毒素的大肠埃希菌，其中 23 株为 O157：H7。标本来源于吉林市防疫站、长春市儿童 医院、北京流行病研究所和美国马里兰大学。质