蠲脉I号化痰消食拆方促进蛋白激酶B表达抑制内皮细胞白噬性死亡.pdfVIP

2014年 1月第3l卷第 1期 广州中医药大学学报 January2014，Vo1．31，No．1 JournalofGumlgzhouUniversityofTraditionalChineseMedicine 79 蠲脉 I号化痰消食拆方促进蛋白激酶B 表达抑制 内皮细胞 白噬性死亡 白晔 ， 李菲 ， 黄凤媛 ， 邓柏杨2 李熙灿3 陈东风 ， 黎晖 ， 邓汝东 ， 周健洪 (1．广州中医药大学解剖学教研室，广东广州 510006；2．广西中医药大学附属瑞康医院。 广西南宁 530011；3．广州中医药大学中药学院．广东广州 510405) 摘要：【目的】探讨蠲脉 I号化痰消食拆方 (简称化痰消食方)对 自噬损伤内皮细胞保护作用的物质基础。以及对蛋白激酶B (PKB)和自噬相关的微管相关蛋白LC3、泛素结合蛋白P62表达的影响。 【方法】采用递增极性溶剂法分别分离提取化痰消 食方 (成分为半夏、茯苓、枳实、白术、山楂、神 曲)的石油醚、乙酸乙酯、乙醇以及水部位。将 4个部位的提取物分别作 用于过氧化氢诱导的 自噬性损伤内皮细胞 ，应用四甲基偶氮唑盐 (MTI)法观察 内皮细胞的活性 ．采用Gc—MS (gas chromatography—massspectrometry) 分析有效部位的化学成分。并采用Westemblot法观察有效部位对PKB表达及 自噬的影 响。 【结果】石油醚部位为化痰消食方保护内皮细胞 自噬性损伤的活性部位；GS—MS检测发现石油醚部位主要成分为多种脂 肪酸；Westernblot分析结果显示：石油醚部位能上调PKB表达、下调LC3表达，抑制LC3一I向LC3一II转化 ．并使细胞内 P62表达水平升高。 ~【i-e】石油醚部位多种脂肪酸为化痰消食方有效部位，能促进细胞 内PKB表达 。抑制细胞内的自噬水 平．从而拮抗 内皮细胞的 自噬性死亡 关键词：蠲脉 I号化痰消食拆方：内皮细胞：自噬：细胞培养 中图分类号：R285．5 文献标志码：A 文章编号：1007—3213(2014)0l一0079—07 高脂血症是机体脂质代谢或运转异常导致血清 胞功效。但其对内皮细胞的保护作用机制尚不明确 中脂质增高的病症 血液中脂质增多。会激活机体 Akt蛋白家族是一个在细胞凋亡、细胞增殖等 血管内皮的氧化应激 ．引起内皮细胞内环境的紊乱 细胞生理病理活动的调控中起至关重要作用的蛋白 以及 自噬的过度激活 ．从而诱导细胞的损伤[1-3]： 激酶 ，其家族成员主要有 Aktl(PKA)、Akt2 同时．在血液脂质水平升高的环境下，自噬功能紊 (PKB)和Akt3(PKC)．它们调控细胞凋亡和增殖 乱的内皮细胞 ．自我修复能力减弱．对其他损伤因 的途径各不相同．其中PKB被认为是对抗内皮细 素的防御能力降低_4_．细胞损伤加重 ．甚至出现细 胞氧化应激性损伤的重要激酶．它主要通过调控 自 胞凋亡及 自噬性死亡 因而．内皮细胞 自噬过度激 噬通路发挥作用 ] 活引起的细胞死亡是多种血管性疾病 (例如肢体动 本研究将蠲脉 I号化痰消食拆方 (简称化痰消 脉硬化性闭塞症、糖尿病血管病变、冠心病、脑动 食方)作用于过氧化氢诱导的自噬性损伤人脐静脉 脉硬化症、脑卒中等)发病的重要机制[s。 内皮细胞 (HUVECs)模型，探讨该方保护内皮细 现代中医药研究认为．痰滞血脉是高脂血症的 胞的物质基础 ，及其对 PKB、与 自噬相关的微管 基本病机[ 临床实践发现．化痰消食健脾的中药 相关蛋白LC3、泛素结合蛋白P62 (简称为LC3及 能有效降低高脂血症患者的血脂水平 。对多种血管 P62)表达的影响．现报道如下 疾病有一定的防治作用_8_m]有学者通过动物实验 也证实。半夏、陈皮等传统化痰中药以及白术、山 1 材料和