溃结灵对溃疡性结肠炎大鼠结肠黏膜E1、UBC5、E3RSIKBmRNA与蛋白表达的影响.pdfVIP

2014年 1月第31卷第 1期 广州中医药大学学报 January2014，Vo1．31，No．1 JournalofGuangzhouUniversityofTraditionalChineseMedicine 99 溃结灵对溃疡性结肠炎大鼠结肠黏膜 E1、UBC5、E3RSIKBmRNA与蛋 白表达的影响 邹娟， 李燕舞， 郭珍， 唐立海， 巫燕莉， 刘梓峰， 杜群 (广州中医药大学脾 胃研究所 ，广东广州 510405) 摘要： 【目的】观察溃结灵对溃疡性结肠炎 (uc)模型大鼠结肠黏膜泛素一蛋白酶体系统组分UBE1(E1)、UBC5(E2)、 E3RSIKB(E3)基因和蛋 白表达的影响。【方法】选用SD大鼠，随机分为6组：正常组，模型组，溃结灵高、中、低剂量组 (剂量分别为 18-3、9．2、4．6g·kg一·d一)，阳性对照组 (柳氮磺胺吡啶，剂量为O．5g·kg ·d一)；采用三硝基苯磺酸 (TNBS) 法复制 UC大鼠模型并进行不同剂量药物干预 采用逆转录一聚合酶链反应 (RT—PCR)法检测结肠黏膜 E1、UBC5和 E3RSIKB基因表达，酶联免疫吸附测定 (ELISA)法检测结肠黏膜E1、UBC5和E3RSIKB蛋白含量 【结果】模型组大鼠结肠 黏膜组织E1、UBC5mRNA和蛋 白相对表达量与正常组比较 ，差异均无统计学意义 (P0．05)，溃结灵各剂量组E1、UBC5 mRNA和蛋白相对表达量 (除溃结灵高剂量组UBC5蛋白表达外)与模型组比较 ，差异均无统计学意义 (P0．05)：模型组 大鼠结肠黏膜组织E3RSIKBmRNA相对表达量显著高于正常组 (P0．05)，渍结灵高、中剂量组 E3RSIKBmRNA相对表达 量显著低于模型组 (P 0．05)；模型组大鼠结肠黏膜组织E3RSIKB蛋白相对表达量显著高于正常组 (P0．05)，溃结灵高、 低剂量组E3RSIKB蛋白相对表达量显著低于模型组 (P0．05或P0．()1) 【结论】溃结灵抗 uc作用的机理可能与抑制 E3RSIKB的表达 。阻止IKB的泛素化降解，进而抑制NF—KB的活化，减轻炎症反应有关。 关键词：溃结灵／药理学；溃疡性结肠炎／中药疗法；基因表达调控 ；蛋白表达；疾病模型，动物；大鼠 中图分类号：R285．5 文献标志码：A 文章编号：1007—3213 (2014)01—0099—05 目前研究表明：核转录因子一KB nuclearfactor 活化的相关作用机制，现报道如下。 kappa-B．NF—KB)活化与溃疡性结肠炎 (UC)的发 生发展密切相关 核因子KB抑制蛋白 (IKB)的泛 l 材料 与方 法 素化降解是 NF—KB激活的必经之路E 泛素系统抑 1．1 动物 sD大鼠，SPF级．雄性 ，体质量 180 制剂可以抑制N KB的活化E23．并对以NF_KB活化失 ～ 220g。广东省医学实验动物中心 ，合格证号 ： 调为特征的部分疾病如肠炎、帕金森病、肿瘤等有治 0087749。 疗作用 参与泛素一蛋白酶体系统反应的酶至少 1．2 药物 溃结灵药材 (救必应、白术、白芍、水 有 3类 ：E1为泛素活化酶；UBC5属于泛素连接酶 蛭等)购于采芝林连锁药店．经广州中医药大学中药 E2中一种．为与E3RSIKBE3酶特异性结合的E2分 鉴定教研室童家贽博士鉴定．所购药材均符合中华人 子：E3RSIKB是干细胞因子 (SCF)家族蛋白中一 民共和国药典标准。按组方比例称取药材．常规方法 员．也被命名为 3[-Trcp．其功能为能够识别 IKB分 制备水煎液。大鼠低、中、高剂量按成人用量的5、 子上以磷酸化的Ser位点为核心的结构．引导特异的 10、20倍计算，即含生药量4．6、9．2、18．3嚣／1(g，药 E2泛素连接酶与底物结合，从而促使IKB的降解。 物用蒸馏水配成460、920、1830g／L。柳氮磺胺毗 目前国内尚未有泛素—蛋白酶体系统与UC发生机制 啶 (SASP)，批号：200906005，由上海三维制药有 之间关系的研究 本研究在