RNA干扰抑制c—Met表达对喉癌Hep-2细胞体内外生长的影响.pdfVIP

2010年 1月第 45 HcadNeckSI】 ．January2010，Ve1．45，No．1 · 61 · ． 论 著 ． RNA干扰抑制 c—Met表达对喉癌 Hep一2 细胞体 内外生长的影响 姬长友 谢治年 陈继川 王宜南 关力谦 李洪涛 张民 刘蓉蓉 【摘要】 目的 采用RNA干扰 (RNAi)技术抑制人喉癌Hep一2细胞c—Met基因表达 ，观察对其 体外生物学活性和体内生长的影响。方法 构建能够表达针对 c—Met的小干扰RNA的RNAi质粒和 表达不针对任何已知mRNA 的siRNA 的阴性对照RNAi质粒，采用阳离子脂质体 Lipofectamine2000 作为转染试剂将其转染人喉癌细胞株Hep-2，通过RT—PCR及WesternBlot方法检测转染效率 ，筛选出 抑制效果最好的c—Met—siRNA序列 ；通过四甲基偶氮唑蓝 (M1丫r)法、运动实验及侵袭实验 比较转染前 后细胞的生长、运动及侵袭能力。在裸 鼠喉癌皮下荷瘤模型模拟 c—Met—siRNA基因治疗实验中，采用 WesternBlot法检测重组质粒对 c—Met基因及 MMP一9、VEGF基 因表达的影响。结果 pSilencer2．O／ c—Met—shRNA转染人喉癌细胞株 Hep一2后，c—Met的mRNA和蛋 白表达水平显著降低 (P值分别为 0．003和0．02)，细胞的生长、运动及侵袭均受到明显抑制 (P值分别为 0．001，0．004和 0．004)。肿瘤 接种到裸 鼠后第 35天，重组质粒组肿瘤体积为 (138±27)mm ，与对照组相 比差异有统计学意义 (P0．O1)；重组质粒组瘤体内c—Met、MMP-9、VEGF基 因表达率比对照组明显降低 (P0．05)。 结论 c—Met—siRNA能成功下调靶基因的表达，并能显著抑制喉癌Hep一2细胞的生长、运动、侵袭及移 植裸鼠成瘤后的生长，siRNA表达质粒介导的基因治疗有希望成为喉癌靶向性 c—Met治疗的新策略。 【关键词】 RNA干扰； 喉肿瘤 ；细胞系 ，肿瘤；原癌基因蛋 白质c—met RNA interferencetargeting c-M etinhibitsproliferation ofhumanlaryngealcarcinom aHep-2cellline invitro and in its xenograftsin nudemice JIChang．you．XIE zhi—nian，CHEN Ji—chuan，WANG Yi—nan，GUANLi—lian，LIHong—tao．ZHANGMin，LlURong—rong．DepartmentofOtorhinolaryngology HeadandNeckSurgery．DapingHospitalandtheFieldSurgeryReseearchInstitute． MilitaryMedical University．Chongqing400D2．C ina Correspondingauthor：XlEzhi—nian．Email：xzn2000@ 126．com A【bstract】 Objective Theproto—oncogenec-Metwasfnundtoexpressonhumanlaryngeal carcinomaHep一2celllineinpreviousresearch．Inthepresentstudy．theauthorfurtherexaminedwhether inhibitionofc-MetbyRNA interference(RNAi)mightinhibitbiologicactivityofHep一2cellline nvitroand proliferationusingamurinelaryngealcarcinomamode1．M ethods RNAiplasmidthatcan expresssmall interferingRNAtargetinge-MetorsiRNAthatdidnotmatchanyknownhumancodingmRNA(controlsiRNA plasmid)wasdesigned，construct