CCI4肝纤维化大鼠TGF-β1表达的动态变化.pdfVIP

第36卷第 1期 西南民族大学学报 ·自然科学版 JournalofSouthwestUniversityforNationalitiesN·aturalScienceEdition 文章编号：1003．2843(201o)ol一0088-03 CCI4肝纤维化大鼠TGF．J31表达的动态变化 胡杰，黄志宏，卢建远，张小琴 (西南民族大学生命科学与技术学院，四川成都 610041) 摘 要：目的 探讨转化生长因子．pl(TGF．p1)在肝纤维化过程中的变化及其意义．方法 40％CCl4一花生油溶液皮下注射 法制备 CCI大鼠肝纤维化模型．第3、5、7、9、11、13周分批处死对照组和实验组大鼠各5只，剖取动物肝脏，HE染 色、Masson染色和免疫组化染色，观察肝纤维化和TGF．B1在大鼠肝组织的表达．结果 在大鼠CCI4肝纤维化形成过程 中，TGF．B1的表达在肝损伤早期即明显增加，并随纤维化程度加重而逐步升高．结论 TGF一311表达与肝纤维化程度成正 相关． 关键词：肝纤维化；TGF—pl；免疫组化 中图分类号：$852 文献标识码：A 肝纤维化是多种慢性肝病共同的病理变化，是各种慢性肝病发展至肝硬化的必经之路．大量的研究表明肝 纤维化的形成是细胞．细胞因子．基质问相互作用、相互调节的结果．肝纤维化主要表现为细胞外基质(ECM)fl~大 量沉积…，有效地预防和逆转肝纤维化是防止肝硬化的关键所在．转化生长因子．p(TGF—pt)是最主要的致肝纤 维化因子，它对 ECM 的分泌有促进作用2J『．本实验通过免疫组织化学方法，并结合该模型的肝脏病理学的动态 变化，研究了TGF．p1在实验性肝纤维化不同时期肝组织中的分布与含量的变化，为进一步阐明TGF-p1在肝纤维 化发生中的作』{j机制做出贡献． 1材料和方法 1．1 买验动物 清洁级雄性大鼠90只，体重 l80．220g，由川北医学院提供． 1．1 主要实验仪器及试剂 AO旋转式切片机(美国)．兔抗大鼠TGF．pl、抗兔 SABC试剂盒及DAB显色试剂盒均购于武汉博士德公一J． 1．2 实验动物分组及模型建立 分组：大鼠适应陛正常喂养一周后，随机分为2组，正常对照组和cc14损伤组(模型组)． CC14损伤方法：模型组大鼠皮下注射40％CC14一花生油溶液，每隔三天给药一次，首次0．5ml／100g体重，其后 每次0．3ml／100g．对照组以生理盐水皮下注射做对照．自由进食与饮水． 1_3 组织学与免疫组织化学检查 于第3、5、7、9、11、l3周分别随机断颈处死对照组和实验组大鼠各5只，在每只大鼠肝脏相同部位切取组织 块(第三周末五只大鼠肝组织标本分别标记为M3a、M3b、M3c、M3d、M3e，五只对照大鼠标本分别标记为D3a、 D3b、D3c、D3d、D3e，余同)，4％多聚甲醛固定，石蜡包埋，5m厚连续切片，HE染色、胶原纤维染色和免疫组化 染色．按2000年(西安)修订的病理组织学诊断标准进行肝纤维化分期3【】，免疫组化染色按试剂盒说明进行． 收稿 日期：2009．11．30 联系作者：黄志宏(1963一)，男，西南民族大学生命科学与技术学院副教授 基金项目：西南民族大学研究生创新型科研项 目资助． 第 1期 胡杰等：CCI4肝纤维化大鼠TGF．p1表达的动态变化 89 2 结果 2．1 病理组织学改变 对照组大鼠肝小叶结构完整，肝细胞索排列整齐，无炎性细胞浸润(图 1)．M3组实验大鼠中央静脉周围和门 管区已有成纤维细胞增生，有少量纤维束形成．M5组实验大鼠的中央静脉周围和门管区纤维组织增生明显，胶 原纤维增多．M7组、M9组和MI1组各有部分实验大鼠肝脏形成假小叶，病变计分逐渐升高．M13组所有实验大 鼠肝脏形成假小叶(图2)．M3组、M5组、M7组、M9组大鼠肝细胞发生脂肪变性，实验过程中脂肪变性逐渐加 重．在假小叶大量形成(M11组)以后，假小叶内无明显脂肪变性．实验组大鼠肝纤维化分期及病变评分见表 1． 表 1 大鼠实验性肝纤维化组织病理学概要 分期 M3 D3 M5 D5 M7 D