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第27卷 第 1期 应 用 化 学 V01．27No．1 2010年 1月 CHINESEJOURNALOFAPPLIEDCHEMISTRY Jan．20l0 聚乙烯醇、聚乙烯胺与淀粉酶相互作用荧光光谱 王 峰” 梁力曼 顾正彪 崔正刚。 (。江南大学化学与材料工程学院 无锡214122；河北科技师范学院化学系 秦皇岛；江南大学食品学院 无锡) 摘 要 采用荧光光谱和紫外吸收光谱法研究聚乙烯醇(PEG)和四乙烯五胺 (TEPA)与淀粉酶相互作用。结 果表明，PEG会增强淀粉酶内源性荧光和酪氨酸残基所处微环境的疏水性；TEPA对淀粉酶内源性荧光的猝 灭机制属于动态猝灭，但同时也存在静态猝灭特征，并使色氨酸残基所处微环境的极性增大；在所考察的范围 内，PEG与淀粉酶的结合常数在4O℃达到最高，TEPA对淀粉酶荧光的动态猝灭结合常数在 30℃以上趋于 最大，PEG、TEPA与淀粉酶之间的作用力属于疏水与静电作用相结合。 关键词 聚乙烯醇，聚乙烯胺 ，淀粉酶，相互作用 中图分类号 ：0629．8 文献标识码：A 文章编号：1000-0518(2010)Ol-0096-06 聚乙烯醇(PEG)和聚乙烯亚胺 (PEI)类物质被广泛用于医用材料、药物载体、分子生物学和蛋白质 化学等领域。PEI能与蛋白质分子或者抗体形成复合物 ¨J，协助药物穿过细胞膜释放。PEI还可用来保 持肌乳酸脱氢酶的活性，使其免受金属毒害和过氧化物氧化效应的影响 j。近年，Pardo等 利用 PEI 在石墨电极上负载肌红蛋白用于氧的电化学还原和三氯乙酸的脱氯反应催化研究。PEG常用作蛋白质 结晶助剂，提高蛋 白质在溶液中的溶解度H和增强蛋 白质分子间的吸引力，从而有利于蛋 白质结晶的 形成 。在蛋白质微阵列芯片技术中，PEG被用于包埋功能分子 。固定化酶技术方面，在固载体表面 接枝PEG或者PEI可缓冲蛋白质与固相表面的直接碰撞，维持酶分子的正常构象和活性 ’引。本文以 淀粉酶作为模式蛋 白，采用荧光光谱法和紫外吸收光谱法研究了聚乙烯醇、聚乙烯胺与淀粉酶分子间的 相互作用。 1 实验部分 1．1 仪器和试剂 RF-5301PC型荧光分光光度计(日本岛津Shimadzu公司)；TU一1901型双光束紫外-可见分光光度计 (北京普析通用仪器有限责任公司)。淀粉酶 (Bacillussp．，分子量55kDa)、聚乙烯醇(PEG，平均分子量 400，购 自Sigma公司)，四乙烯五胺 (TEPA，购 自Fluka公司)，磷酸氢二钠、磷酸二氢钠均为分析纯，所 用水为二次蒸馏水。磷酸盐缓冲溶液(pH=7．4)浓度为0．02mol／L，用84．0mL0．02mol／L的Na：HPO 溶液与 16．0mL0．03mol／L的NaH2PO4溶液混合配制。 1．2 实验方法 1．2．1 TEPA、PEG与淀粉酶作用的荧光光谱 在 10mL容量瓶中，加入2mL的淀粉酶磷酸盐缓冲溶 液，然后依次加入不同浓度的PEG或TEPA磷酸盐缓冲溶液，混合均匀，用磷酸盐缓冲溶液定容至刻 度，以280nm为激发波长，荧光分光光度计的发射与激发狭缝宽度均为5nm，于300—400nm波长范围 内记录发射光谱。荧光发射谱的背景散射用缓冲溶液校正。 1．2．2 TEPA、PEG与淀粉酶作用的紫外光谱 在 10mL容量瓶中，加人2mL的淀粉酶磷酸盐缓冲溶 液，然后依次加人不同浓度的PEG或TEPA磷酸盐缓冲溶液，混合均匀，用磷酸盐缓冲溶液定容至刻 度，以磷酸盐缓冲溶液为参比，记录200～400nm范围内的紫外吸收光谱。 2009-01—12收稿 ，2009-04-28修回 国家高技术研究发展计划(“八六三”计划2006AA10Z335)资助项 目 通讯联系人：王峰，男，博士，副教授；E—mail：fwang@jiangnan．edu．ca；研究方向：生化反应工程 第 1期 壬峰等：聚乙烯醇、聚乙烯胺与淀粉酶相互作用荧光光谱 ．；d ＼ 一兽 l 1．2．3 TEPA、PEG与淀粉酶作用的同步荧光测定 激发