细胞培养的污染和检测.pdfVIP

细胞污染的种类可分成细菌、酵母菌和霉菌。无菌操作技术 不当、操作室环境不佳、污染之血清和污染之细胞等是主要的 污染源。严格之无菌操作技术、清洁的环境、与品质良好之细 胞来源和培养基配制是减低污染之最好方法。 1、细菌的污染和检测 •肉眼直接观察法 •培养检查法 •显微镜观察法 •PCR检测 •细菌污染是实验室细胞培养中常见的污染，即使在细胞培养液中加入 了抗菌素，也可能因为操作不慎而引起污染。最常见的有革兰氏阳性菌， 如枯草杆菌、白色葡萄球菌，以及大肠杆菌、假单胞菌等革兰氏阴性菌。 •培养细胞受细菌污染后，会出现培养液变混浊，pH改变。污染后细胞 发生病理改变，胞内颗粒增多、增粗，最后变圆脱落死亡 细胞污染后怎么办？ • 真菌（霉菌和酵母菌）：一旦发现有它的存在说明细胞已 被污染了；目前没有好的抑制方法。 处理： • 在这种情况下最好赶紧将该瓶细胞扔掉，免得引起培养箱 中的大规摸污染。 • 细菌：细菌污染后，培养基1-2天就会变色，对细胞生长 影响明显。 处理： • 应迅速将污染细胞与其它细胞系隔离，灭菌后丢弃，还要 用实验室消毒剂消毒培养器皿和超净台。 • 支原体：污染后，因它们不会使细胞死亡可以与细胞长期 共存，培养基一般不发生浑浊，细胞无明显变化，外观上 给人以正常感觉，实则细胞已经受到多方面潜在影响，如 引起细胞变形，影响DNA合成，抑制细胞生长等，往往被 大多数实验者忽视。 处理： （1）加温：根据支原体对热敏感的特点，将受支原体污染的 细胞放在41度作用4~5小时，最长不超过18小时，以杀灭 支原体。但如此高的温度对细胞生长本身也有影响，因而 在实验前先用少量细胞膜所最适合的温度和时间，以尽可 能保证杀灭支原体而细胞本身又不受损伤。 （2 碰到到这种问题只有仍掉，重新复苏，如果没备份的话 建议使用去除支原体的试剂（如ant-mpt 支原体抗生素 加 入培养液冲击处理。 • 非同种细胞：即细胞交叉污染，由于细胞培养操作时各细 胞株所需的器材和溶液没有严格分开，往往会使一种细胞 被另一种细胞污染。 处理： • 丢掉 灭菌技术目前主要有紫外灯照射、湿热、消毒剂擦拭 、干热等 • 紫外灯照射：有效性受很多因素影响，如遮挡、时间、强度 、照射距离，湿度等。 • 湿热：通常用于高压蒸汽灭菌中，比较少用在CO2培养箱上 ，湿热灭菌在常压下又叫煮沸法，煮沸的水温一般至少需为 100℃，细菌繁殖体煮沸5分钟被杀死，但芽胞常需煮沸2小 时以上才可被杀死； • 消毒剂擦拭法：主要适合于平整的表面如实验台面，而箱体 内部设计的死角、各种器件因无法擦拭等因素导致灭菌效果 也很有限，而且含氯、碘的消毒剂对于不锈钢有腐蚀作用， 不能对不锈钢箱体进行擦拭灭菌。 • 高温干热空气灭菌：是如今世界公认的最有效的灭菌技术， 能彻底消灭所有微生物污染源（包括耐高温的芽孢杆菌）。