钾离子通道阻滞剂对人卵巢颗粒细胞增殖、凋亡及孕酮分泌的影响及机制与研究.pdf

中文摘要 钾离子通道阻滞剂对人卵巢颗粒细胞增殖、凋亡及孕酮分泌的影 响及机制研究 摘 要 卵巢内卵泡的发育是卵巢内分泌及旁分泌影响下协调发展的过程，卵 巢的颗粒细胞围绕在卵母细胞周围对随后的卵泡发育、排卵、卵子受精及 胚胎种植发挥重要的作用。在卵泡的生长发育过程中，一簇窦卵泡中仅选 择出一个主导卵泡，而大多数卵泡则发生闭锁(凋亡)。颗粒细胞经过有 丝分裂(增殖)，随后获得促性腺激素受体具备生成甾体激素的能力(分 化)，排卵前卵泡的颗粒细胞对黄体的形成有重要的作用，而未排卵的卵 泡的颗粒细胞则发生凋亡。卵泡闭锁过程中颗粒细胞的凋亡发挥重要的作 用，不仅窦卵泡发生闭锁，所有发育阶段的卵泡均可发生闭锁，颗粒细胞 的普遍命运是凋亡。已有研究表明颗粒细胞的增殖凋亡状态可影响卵泡的 发育，卵母细胞的质量及后续的胚胎发育。迄今，参与调控颗粒细胞增殖 凋亡的基因表达及分子机制尚不十分清楚，因此全面探讨颗粒细胞增殖、 凋亡及其相关基因的表达对进一步明确颗粒细胞功能状态对于卵母细胞 的命运、卵巢的功能的影响有重要意义。 卵巢颗粒细胞的增殖、分化、凋亡的机制及其调控非常复杂，牵涉到 复杂的分子作用机制和信号转导通路。钾离子通道是目前发现的亚型数目 最多的一类细胞膜离子通道，在调控细胞动作电位的形成、膜复极化、维 持静息电位的水平以及在细胞的分泌和肌细胞的紧张等一系列细胞生理 活动方面起着重要作用，是生物电活动的基础，在细胞内和细胞间信号传 递中起着重要作用。研究发现卵巢颗粒细胞存在电压依赖的钾离子通道， 颗粒细胞电活动的调节为研究其细胞功能提供了一种新方法，颗粒细胞的 去极化是卵母细胞成熟的重要特征，通过电耦相连的颗粒细胞和卵母细胞 之间的联系可能代表了一种重要的信号传导通路，但迄今为止，颗粒细胞 功能与钾离子通道信号通路之间的关系仍不清楚。 基于上述，本课题以此为切入点进行深入研究，第一、二部分首先通 过检测人卵巢黄素化颗粒细胞增殖、凋亡相关基因的表达情况，探讨并明 确颗粒细胞增殖、凋亡状态及相关基因的表达在卵泡发育中的作用及对卵 中文摘要 巢功能的影响，第三部分从钾离子通道水平对颗粒细胞进行深入研究，探 4．AP)阻滞后，颗粒细胞的增殖、凋亡及孕激素分泌的改变及其可能的 作用机制，以期为颗粒细胞功能调控与卵泡发育、闭锁及卵母细胞成熟等 生理、病理学问题提供一些理论基础，对不孕症的诊断和防治提供新思路。 第一部分：人卵巢黄素化颗粒细胞细胞周期蛋白D2的表达与卵巢功能的 相关性研究 D2) 目的：通过检测人卵巢黄素化颗粒细胞细胞周期蛋白D2(cyclin cellnuclear 及mRNA的表达，并以增殖细胞核抗原标记指数(proliferating cell，GC)增殖 antigenlabelingindex，PCNA—LI)作为颗粒细胞(granulosa D2的表达在卵母细胞发育成熟进程中的作用及 活性参数，初步探索cyclin 对妊娠结局的影响，探讨颗粒细胞的增殖状态对卵巢生殖功能的影响。 vitro 方法：收集32例行体外受精．胚胎移植(in 不同将卵巢反应性分为为高反应组(卵泡直径16mm以上的卵泡数90 个)、中反应组(卵泡数5—19个)及低反应组(卵泡数g个)。采用免疫 D2及PCNA蛋白的表达；逆转 细胞化学方法检测颗粒细胞膜上细胞cyclin 录聚合酶链反应(reverse chain transcriptase．polymerase