骨髓间充质干细胞静脉移植对脑梗死大鼠治疗作用研究.pdf

中文摘要 骨髓间充质干细胞静脉移植对脑梗死大鼠 治疗作用的研究 摘 要 Marrow 目的：大鼠骨髓间充质干细胞(Bone Stem Mesenchymal B．巯基乙醇体外诱导其向神经组织分化，电镜及免疫细胞化 学染色法鉴定分化细胞方向；Longa改良线栓法建立大鼠大 Cerebral 脑中动脉阻塞(Middle Artery 型，观察第4代骨髓间充质干细胞静脉移植对成模大鼠的治 疗效果；明确骨髓间充质干细胞是否可经血液循环归巢至受 损脑区；是否可在脑内存活、迁移、并向神经组织分化；是 否促进神经生长因子(Nerve growth 神经生长因子(Brain．drivedfactor，BDNF)、 neurotrophic endothelial 血管内皮细胞生长因子(Vascular factor， growth VEGF)的分泌；是否减少脑缺血半暗带区细胞凋亡。以此 探讨BMSCs的生物学特性及静脉移植治疗大鼠脑梗死的效 果和机制。 方法： 心法结合贴壁法分离培养BMSCs，传代扩增，取第4代细 胞进行诱导分化，倒置相差显微镜下进行形态学观察。 +lmmol／L B．巯基乙醇+20％FBS预诱导24小时后， L．DMEM+5mmol／L B．巯基乙醇诱导5小时，之后去除诱导 中文摘要 液为常规培养基，再培养2周。‘ 3诱导后进行细胞鉴定：倒置相差显微镜下观测细胞形态学 变化；透射电镜观察细胞超微结构的改变；免疫细胞化学染 色法对诱导细胞进行神经前体细胞表面标志(神经上皮巢蛋 白nestin)、神经元细胞表面标志(神经元特异性烯醇化酶 neuron specific acidic 质纤维酸性蛋白glialfibrillary 天，待第4代细胞长满瓶底时收集细胞，待移植。 Cerebral 改良线栓法制作大鼠右侧大脑中动脉阻塞(Middle Artery 成两组，BMSCs移植组和PBS对照组，每组25只。 6于MCAO 后7、14、21天各组大鼠分别进行改良神经功能缺损评分 Severity (modifiedNeurological 天，各组大鼠分别随机取5只进行TTC染色测定梗死体积； 再于同一天和第14、21、28天两组各处死大鼠5只，灌注 取脑，多聚甲醛固定，梯度酒精脱水，二甲苯透明，石蜡包 埋，制作石蜡切片。分别行HE染色观察脑缺血病理改变； TUNEL染色观察细胞凋亡；免疫组织化学染色鉴定移植入 泌。 7统计学处理 中文摘要 分析软件进行数据处理。两组间同一时间点样本均数采用两 独立样本t检验，同一组内不同时间点组间均数之间采用单 因素方差分析。所有数据以均数±标准差(i土S)表示，以P O．05表示差异具有统计学意义。 结果： 1 BMSCs接种初期细胞呈圆形悬浮状态，24小时后大部分 细胞贴壁。贴壁细胞单个分散存在或形成数个细胞克隆，逐 渐伸角变形，呈圆形、多角形、长梭形等多种形态。传代后， 细胞形态逐渐纯化，至第4代，形态单一，呈长梭形，漩涡 状和平行排列生长。 2预诱导后细胞形态无明显变化，加入诱导液后细胞形态迅 速改变，诱导5小时部分细胞漂浮、崩解、死亡，