骨髓间充质干细胞移植及淮山药预处理对大鼠肾脏微血管损伤保护作用的实验与研究.pdfVIP

骨髓间充质干细胞移植及淮山药预处理对大鼠肾脏微血管损伤保护作用的实验研究 中文摘要 骨髓间充质干细胞移植及淮山药预处理对大鼠肾脏 微血管损伤保护作用的实验研究 中文摘要 目的：应用SD大鼠肾脏缺血再灌注损伤模型，探讨骨髓间充质干细 胞(MSCs)移植及淮山药灌胃预处理在对肾脏缺血再灌注损伤后微血管 方面的保护作用。 方法： 体外实验：采用梯度离心和贴壁筛选法分离纯化MSCs，取第三代的 态学观察、细胞组织化学染色、超微结构观察。 体内试验： 1．选用60只雌性SD大鼠(4～6周龄)随机分4组进行动物实验。正常对 照组(N，n=6)常规麻醉后行剖腹手术下腔静脉采血和收获肾脏标本； 缺血再灌注损伤组(I瓜，n=18)常规麻醉后行剖腹手术，游离左侧肾蒂 血管后无损伤动脉夹阻断左肾血流60min后恢复血流，关闭腹腔，再灌 离左侧肾蒂血管后无损伤动脉夹阻断左肾血流60min后恢复血流，关闭 lml(1 血再灌注淮山药灌胃预处理联合干细胞移植组(淮山药MSCs组，n=18) 动物造模前五天，用淮山药109／kg体重灌胃，连续五天，游离左侧肾蒂 骨髓问充质干细胞移植及淮山药预处理对大鼠肾脏微血管损伤保护作用的实验研究 中文摘要 血管后无损伤动脉夹阻断左肾血流60min后恢复血流，关闭腹腔，再灌 注后60min股静脉穿刺，输注BrdU标记的MSCs细胞悬液lml(1x106／m1) 再分别于再灌注6h，48h，2w后采血和收获肾脏标本。 2．应用全自动生化分析仪测定血清BUN、Scr，了解肾功能；内皮素放免 药盒体外放射免疫分析法检i燹!【肾脏组织匀浆内皮素水平(ET)；肾脏标本 常规病理切片，H-E染色观察肾组织损伤情况；免疫组化S．P法检测细胞 增殖情况， BrdU、FⅧ．RAgIjH性细胞分布情况。 主要结果： 体外实验：MSCs细胞为纺锤形，梭形的成纤维细胞形态．力口入VEGF、 bFGF后可见到部分扁平宽大的长梭形细胞胞质向核收缩，变成不规则 形，多角形或圆形，有些区域呈“铺路石”样征象。诱导后的MSCs做透 射电镜检测，部分细胞胞浆内可观察到Weibd．Palade小体。 体内实验： 48h较同时间点MSCs组明显减低，有显著性统计学差异(尸O．05)， 缺血再灌注损伤2w后，两组的组织学评分比较相近，无显著性统计学差 异(尸O．05)。 mmol／L)、淮山药MSCs 上升，MSCs组(61．93士5．05pmol／L、11．05+1．32 8+4．53 组(50．40士3．3 mmol／L)与I／R组(75．3 8“mol／L、8．82+0．49 jamol／L、 TT 骨髓间充质干细胞移植及淮山药预处理对大鼠肾脏微血管损伤保护作用的实验研究 中文摘要 18．72+0．59 5．37+1．69 retool／L)较 再灌注损伤48h后仅I／R组(79．09i3．32肛rnol／L、1 mmol／L)较N (45．634-2．09lgnol／L、6．104-0．53 5．88+0．52 mmol／L)较N组均无显著性统计学差异(尸O．05)。 3．肾血管内皮功能情况：N组肾组织匀浆ET水平为158．254-15．13 pg／ml； 258．304-25．04 织匀浆ET值却较N组无显著性统计学差异(PO．05)；缺血